[發(fā)明專(zhuān)利]人感染H7N9禽流感表位抗原及其在免疫檢測(cè)試劑中的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310323303.2
• 申請(qǐng)日: 2013-07-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103450350A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 修冰水;張賀秋;張勵(lì)力;陳堃;楊錫琴;馮曉燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/11
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/11;G01N33/569
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人感染H7N9禽流感抗原，還涉及該抗原在制備檢測(cè)人感染H7N9禽流感抗體檢測(cè)中的用途。

背景技術(shù)

盡管2013年3月發(fā)現(xiàn)的人感染H7N9禽流感病毒多為散發(fā)病例，尚無(wú)人與人之間傳播的確切證據(jù)，但已經(jīng)波及10省市，上百人感染，數(shù)十人死亡，引起國(guó)家衛(wèi)生和防疫部門(mén)的高度重視。

流感病毒根據(jù)核蛋白和基質(zhì)蛋白的抗原特性和差異分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。甲型流感依據(jù)其外膜血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)蛋白抗原性不同，目前可分為16個(gè)H亞型(H1～H16)和9個(gè)N亞型(N1～N9)。其中H1N1、H2N2、H3N2亞型為我國(guó)人群常見(jiàn)甲型流感流行亞型，而H5、H7、H9亞型主要感染禽，其中H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3可感染人，2013年暴發(fā)的人感染H7N9流感病毒為新型重配病毒，是國(guó)際上首次報(bào)道H7N9能感染人的病例。

H7N9病毒屬于正粘病毒科甲型流感病毒屬，為單股負(fù)鏈RNA病毒，含有8個(gè)大小不等的基因節(jié)段。序列同源分析發(fā)現(xiàn)此次新發(fā)的人感染H7N9禽流病毒中的6個(gè)基因節(jié)段與2012年北京花雞中分離的A/brambling/Beijing/16/2012-like?viruses(H9N2)病毒高度同源；其余兩個(gè)基因節(jié)段中，HA基因與浙江鴨子身上分離的A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N3)亞型中H7抗原高度同源，NA基因與韓國(guó)野鳥(niǎo)中分離的A/wild?bird/Korea/A14/2011(H7N9)N9抗原高度同源，但兩者的H7抗原并不相同，提示此次新發(fā)的H7N9禽流感病毒是以H9N2為內(nèi)部基因的新型重配病毒(Gao?R，Cao?B，HuY，et?al.Human?infection?with?a?novel?avian-origin?influenza?A(H7N9)virus.N?Engl?J?Med.2013May16；368(20)：1888-97)。

HA和NA抗原是流感病毒表面的重要糖蛋白，具有很高的變異性，是流感病毒區(qū)分亞型的依據(jù)。其中HA抗原具有很強(qiáng)的免疫原性，并能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體，是疫苗研究中的重要組份；NA抗原能水解唾液酸，是抗病毒藥物研究的重要靶標(biāo)。HA抗原在體內(nèi)水解后形成HA1、HA2兩個(gè)亞基，其中HA2相對(duì)保守，主要負(fù)責(zé)病毒與細(xì)胞之間的膜融合，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顯示抗HA2抗體沒(méi)有很強(qiáng)的保護(hù)性抗體產(chǎn)生。不同亞型之間HA1抗原的變異較大，其抗體具有明顯保護(hù)作用，如果去掉的抗HA1抗體，血清中的其他抗體不能有效抑制發(fā)生紅細(xì)胞凝集和中和病毒的作用，這些研究提示HA1亞基在H7N9亞型的血清學(xué)鑒定中可能具有重要地位。NA抗原為蘑菇狀的四聚體抗原，其抗C段具有和好的免疫原性，NA抗體能輔助HA抗體進(jìn)行中和作用及血凝抑制功能。已有研究顯示，重組HA1抗原可用于家禽流感病毒的檢測(cè)和疫苗效果的評(píng)價(jià)，但重組HA1抗原用于人感染流感病毒的檢測(cè)未見(jiàn)報(bào)道。

流感通過(guò)快速的變異逃逸機(jī)體原有的免疫反應(yīng)，針對(duì)新的流感病毒株，宿主首先分泌IgM抗體，在對(duì)2009年新發(fā)的甲型H1N1流感的回顧性研究顯示：發(fā)病當(dāng)天就有84.7％的患者產(chǎn)生了抗流感病毒的IgM抗體，與2008年前流感人群血清的交叉性僅為6％；相比之下，IgG抗體在兩組人群中并沒(méi)有顯著區(qū)別，這一發(fā)現(xiàn)提示對(duì)IgM抗體的檢測(cè)能有效區(qū)分新發(fā)流感，具有很好地早期診斷價(jià)值。發(fā)病后4-10天，IgG抗體開(kāi)始出現(xiàn)，患者血清表現(xiàn)出抑制紅細(xì)胞凝集(HI)的現(xiàn)象，當(dāng)清除掉血清中的IgM抗體，HI基本上不受影響；但清除掉IgG，HI作用顯著降低，提示IgG是HI測(cè)試中主要抗體類(lèi)型，在疫苗保護(hù)效果評(píng)價(jià)、臨床轉(zhuǎn)歸中具有重要意義(Qiu?C，Tian?D，WanY，et?al.Early?adaptive?humoral?immune?responses?and?virus?clearance?in?humans?recently?infected?with?pandemic2009H1N1influenza?virus.PLoS?One.2011；6(8)：e22603.)。