[發明專利]豬圓環病毒2型抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法

無效

• 申請號: 201310323054.7
• 申請日: 2013-07-29
• 公開（公告）號: CN103364561A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 廖園園;漆世華;朱薇;秦偉;李建;劉潔;謝紅玲;溫文生;馮釗
• 申請（專利權）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

技術領域

本發明涉及一種檢測試紙及制備方法，具體涉及一種豬圓環病毒2型抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法。

背景技術

豬圓環病毒2型（Porcine?circovirus?type2，PCV2）是引發斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（Postweaningmultisystemic?wasting?syndrome，PMWS）的主要病原，該病主要以患畜生長緩慢、進行性消瘦和多系統病例損傷為特征。除了引發PMWS外，PCV2還與仔豬先天性震顫、豬皮炎腎炎綜合征、豬呼吸道綜合征、母豬繁殖障礙等疾病相關。自1996年在加拿大首次發現PMWS以來，PCV2感染引起的相關疾病已經在全世界廣泛存在。隨著我國養豬業受到PCV2感染的危害日益嚴峻，研制PCV2血清抗體檢測試劑盒的臨床需求迫切。PCV基因組由一條共價閉合環狀單股DNA構成，包含兩個大的開放閱讀框架ORF1和ORF2，分別編碼病毒蛋白復制酶（Rep）和病毒衣殼蛋白（Cap）。Cap蛋白是病毒的主要結構蛋白，含有4個抗原表位，具有較好的免疫原性和抗原性，是檢測該病毒特異性抗體的理想靶抗原。由于該病毒在體外培養不產生細胞病變，病毒繁殖能力低，難于獲得高產量的病毒抗原用于診斷目的。而昆蟲桿狀病毒表達系統以其表達外源蛋白產量高、免疫活性好、產物易純化、反應背景低等優點，在多種動物疫病診斷中得到應用。檢測PCV2的衣殼蛋白抗體可以反映PCV2的抗體水平，對豬群PCV2抗體水平進行監測，可確切了解豬體免疫水平或感染狀況，制定最適免疫程序或淘汰選育，有效預防和控制PCV2的侵襲和傳播，避免因此而引起的重大經濟損失。

目前，國內外采用的PCV2檢測技術主要有：病毒分離培養，間接免疫熒光，免疫酶單層實驗（IMPA），原位雜交（ISH），聚合酶鏈式反應（PCR）等等。上述技術和方法雖然可以檢測PCV2或抗體水平，在實踐中也取得一定的效果。但均存在試驗操作復雜，耗時長，需要特定的專業技能和儀器設備等，成品昂貴等缺點，不易在基層單位普及。而膠體金免疫層析法剛好可以避免以上幾種檢測方法的缺點。該方法是一種很成熟的實驗檢測方法，以其特異性強、成本低，操作簡便，結果可靠、可單份或成批測定、不需任何儀器等優點已被廣泛接受。現有關于豬圓環病毒2型抗體膠體金檢測試紙的專利中一般都是1條對照線（或質控線），結果判讀僅根據檢測線顏色深淺進行，不能進行抗體水平高低的判定。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種豬圓環病毒2型抗體膠體金免疫層析檢測試紙。該試紙采用膠體金標記的豬圓環病毒2型單克隆抗體和膠體金標記的兔IgG做探針，包被羊抗豬IgG抗體、羊抗兔IgG抗體和羊抗鼠IgG抗體，結合樣品吸收區上的純化的豬圓環病毒2型Cap蛋白進行抗豬圓環病毒2型IgG抗體的檢測。

本發明的另一目的在于提供上述豬圓環病毒2型抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種豬圓環病毒2型抗體膠體金免疫層析檢測試紙，包括樣品吸收區、金標探針區、固相化抗體區、吸水區和支撐板，樣品吸收區、金標探針區、固相化抗體區和吸水區鋪設在支撐板上并依次相互部分重疊；所述的樣品吸收區包被有PCV2-Cap蛋白，包被量優選為5～50μg；所述的金標探針區包被有金標探針1和金標探針2；所述的金標探針1為膠體金標記的豬圓環病毒2型單克隆抗體，其標記量優選為每mL膠體金標記5～20μg單抗；所述的豬圓環病毒2型單克隆抗體優選為豬圓環病毒2型Cap蛋白單克隆抗體；所述的金標探針2為膠體金標記的兔IgG，其標記量優選為每mL膠體金標記1～10μg兔IgG；所述的固相化抗體區（自金標探針區至吸水區方向）依次有對照線C1、測試線T、對照線C2和對照線C3；所述的對照線C1包被有羊抗兔IgG抗體，包被量優選為0.05～0.5μg；所述的檢測線T包被有羊抗豬IgG抗體，包被量優選為0.5～5μg；所述的對照線C2包被有羊抗兔IgG抗體，包被量優選為0.5～5μg；所述的對照線C3包被有羊抗鼠IgG抗體，包被量優選為1～5μg。

所述的支撐板的材料優選為粘有一層聚氯乙烯襯膜的聚乙烯板；所述的樣品吸收區的材料優選為玻璃纖維膜；所述的金標探針區的材料優選為聚酯膜；所述的固相化抗體區的材料優選為硝酸纖維素膜；所述的吸水區的材料優選為吸水濾紙。