[發(fā)明專利]miR-23a作為急性主動(dòng)脈夾層鑒別診斷標(biāo)記物的應(yīng)用及其試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310322822.7
• 申請(qǐng)日: 2013-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN103397026A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 景在平;周建;董健;陸清聲;趙志青;包俊敏;馮睿;馮翔;袁良喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

急性主動(dòng)脈夾層（acute?aortic?dissection,AAD）是指主動(dòng)脈內(nèi)高速高壓血流通過(guò)主動(dòng)脈壁上的內(nèi)膜撕裂口進(jìn)入中膜層或中外膜交界處，從而形成主動(dòng)脈真假兩腔，并沿主動(dòng)脈長(zhǎng)軸方向擴(kuò)展，可導(dǎo)致主動(dòng)脈破裂致患者死亡或重要臟器（如：心臟、大腦、腎臟、腸道等）急性缺血引起嚴(yán)重并發(fā)癥，病情兇險(xiǎn)，是累及主動(dòng)脈最嚴(yán)重的疾病之一。我們?cè)谂R床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，很多急性主動(dòng)脈夾層患者在獲得手術(shù)治療前甚至是明確診斷前即因病變主動(dòng)脈破裂而死亡。有調(diào)查研究顯示，未經(jīng)治療的Stanford?A型急性主動(dòng)脈夾層患者發(fā)病初期的死亡率高達(dá)1%～2%/h。經(jīng)合理治療的患者生存率會(huì)大幅提高，尤其是經(jīng)手術(shù)治療的患者，將會(huì)在短期內(nèi)實(shí)現(xiàn)生存率從高死亡風(fēng)險(xiǎn)提高至大于70%。但是，在臨床工作中，針對(duì)劇烈胸痛的患者常規(guī)進(jìn)行的檢查是心電圖和胸部X線透視，這些檢查對(duì)急性主動(dòng)脈夾層的診斷都缺乏敏感度和特異性。從而急性主動(dòng)脈夾層的患者往往不能得到及時(shí)有效的診治，加之有部分患者并未表現(xiàn)出急性主動(dòng)脈夾層的典型臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致急性主動(dòng)脈夾層這一被醫(yī)療工作者發(fā)現(xiàn)并研究200多年的疾病（于1761年由Morgagni第一次報(bào)道）的臨床誤診率仍高達(dá)39%，部分患者只有在尸檢時(shí)才發(fā)現(xiàn)罹患了急性主動(dòng)脈夾層。尤其是在Stanford?A型急性主動(dòng)脈夾層累及冠脈時(shí)，誤診為冠心病、急性心肌梗死（acute?myocardial?infarction,AMI）的可能性非常大；患者往往被施予抗凝、抗血小板、甚至是溶栓治療，導(dǎo)致病情惡性進(jìn)展。因此，及時(shí)明確診斷并采取合理的治療是救治急性主動(dòng)脈夾層患者的關(guān)鍵之一。

目前，急性主動(dòng)脈夾層的診斷主要依賴于影像學(xué)檢查，例如：電子計(jì)算機(jī)X線斷層血管成像、經(jīng)食道多普勒超聲或者核磁共振血管成像，這些檢查對(duì)急性主動(dòng)脈夾層具有非常高的敏感度和特異性。但是，這些檢查是在首診醫(yī)生認(rèn)為該患者有罹患急性主動(dòng)脈夾層可能的情況下進(jìn)行的，且需要接診醫(yī)生首先排除具有相似臨床表現(xiàn)的、發(fā)病率更高的急性冠脈綜合征、肺梗死等疾病；加之這些檢查的操作和等待過(guò)程需要大量時(shí)間，常會(huì)使患者喪失珍貴的早起診療時(shí)機(jī)。因此，尋找急性主動(dòng)脈夾層臨床適用的早期診斷生物標(biāo)記物是目前亟待解決的重要問(wèn)題之一，同時(shí)對(duì)疾病病情發(fā)展轉(zhuǎn)歸的監(jiān)測(cè)及預(yù)后具有重要意義。學(xué)術(shù)界為尋找急性主動(dòng)脈夾層的生物標(biāo)記物進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)了諸如：C反應(yīng)蛋白、D-二聚體、平滑肌肌球蛋白重鏈、鈣調(diào)理蛋白等可能與急性主動(dòng)脈夾層的發(fā)生有關(guān)聯(lián)的一系列生物標(biāo)記物，但由于缺乏特異性、半衰期短或受到假腔血栓化的局限等因素均未能在急性主動(dòng)脈夾層的臨床診治中得到廣泛應(yīng)用。對(duì)此，Ranasinghe等提出了理想的早期診斷指標(biāo)應(yīng)具備的一般特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、能夠反映疾病的病程轉(zhuǎn)歸、快捷、易用、價(jià)格低廉、具有良好的臨床應(yīng)用前景和廣泛的商業(yè)供應(yīng)商；為AAD生物標(biāo)記物的研究提供了理論標(biāo)準(zhǔn)。

在臨床診療過(guò)程中，許多實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目以其迅速、能夠在床邊完成、并且對(duì)疾病具有較高的敏感度和特異性等特點(diǎn)，得到了廣泛應(yīng)用。近年來(lái)科學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)微小RNA（mircoRNA，miRNA）是一類在人類和動(dòng)物廣泛存在并高度保守的小分子非編碼RNA；miRNA在心血管組織細(xì)胞發(fā)育與分化及結(jié)構(gòu)形成異常過(guò)程中扮演了極為重要的角色，本課題組前期針對(duì)主動(dòng)脈夾層組和健康組（遺體捐獻(xiàn)者）主動(dòng)脈標(biāo)本中miRNA進(jìn)行檢測(cè)分析，得到夾層主動(dòng)脈中膜顯著改變的miRNA表達(dá)譜，同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)了主動(dòng)脈夾層中下調(diào)的miR-22與HSP27和EC-SOD相關(guān)(J?vasc?surg.2011;53:1341-9)。新近研究表明，miRNA因具有組織特異性及高度保守的特性，使其具有作為疾病生物標(biāo)記物的可能。例如：Ai等通過(guò)急性心肌梗死患者與對(duì)照組比較，結(jié)合小鼠模型中miR-1的過(guò)表達(dá)，證實(shí)在急性心肌梗死患者循環(huán)血中miR-1水平顯著增高，發(fā)病兩周后恢復(fù)到基礎(chǔ)水平的變化趨勢(shì)；荊清教授等報(bào)道了急性心肌梗死患者相對(duì)健康人循環(huán)血中顯著增高的miR-208a，其血漿水平隨患者病情轉(zhuǎn)歸而變化，并且外周血中miR-208a早于心肌肌鈣蛋白出現(xiàn)的特點(diǎn)，提示miR-208a可能是急性心肌梗死一個(gè)更敏感的早期標(biāo)志物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是基于上述背景技術(shù)，為了解決目前存在的問(wèn)題而進(jìn)行的，目的在于提供靈敏度高、特異性強(qiáng)、能夠反映疾病的病程轉(zhuǎn)歸、快捷、易用、價(jià)格低廉、具有良好的臨床應(yīng)用前景和廣泛的商業(yè)供應(yīng)商的急性主動(dòng)脈夾層分子標(biāo)記以及急性主動(dòng)脈夾層檢測(cè)試劑盒。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案。