[發明專利]基于磁性分子印跡聚合物放大效應的SPR傳感器構建及應用

有效

• 申請號: 201310319972.2
• 申請日: 2013-07-27
• 公開（公告）號: CN103424381A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 梁汝萍;姚桂紅;邱建丁
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N21/55
• 分類號: G01N21/55
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.基于磁性分子印跡聚合物放大效應的SPR傳感器構建，其特征在于所述構建包括以下步驟：

（1）Fe₃O₄?NPs的制備：將2.35?g?FeSO₄7H₂O和4.1?g?FeCl₃6H₂O溶解于90?mL水中，室溫下迅速加入25?mL質量百分濃度為25%的氨水，溶液由橙色變成黑色，再逐滴加入1?mL油酸，于80?oC下反應1?h，獲得平均粒徑為6-7?nm的Fe₃O₄?NPs，上述實驗過程需在氮氣保護下進行；最后，用磁鐵將溶液中的Fe₃O₄?NPs分離出來，于4?°C儲存備用；

（2）磁性分子印跡聚合物的制備：將50?mg?Fe₃O_4?NPs溶解于20?mL、10?mM、pH?8.0的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液中，加入5mL含1?mg/mL毒死蜱的乙腈溶液，室溫下機械攪拌2?h，再加入25?mg多巴胺，室溫下繼續攪拌4?h；反應產物用磁鐵分離出來，用體積比3%醋酸和體積比20%乙腈的混合溶液洗脫印跡的毒死蜱分子和未聚合的多巴胺，直至洗脫液中檢測不到毒死蜱的紫外吸收峰；最后，用二次水將醋酸和乙腈清洗干凈，即獲得含有毒死蜱印跡空腔的磁性分子印跡聚合物；非分子印跡聚合物的制備過程與磁性分子印跡聚合物相似，只是不加入目標分子毒死蜱；

（3）SPR傳感界面的構建：將金片在體積比7:3的H₂SO₄:H₂O₂混合溶液中浸泡2?min，用二次水沖洗干凈并用氮氣吹干，安裝入SPR檢測池；向檢測池中注入50?μL、1?mM的11-巰基十一烷酸溶液，反應2?h，用二次水沖洗后，注入50?μL?0.2?M?1-乙基-3-(3-二甲氨基碳二亞胺)鹽酸鹽和0.05?M?N-羥基丁二酰亞胺混合溶液反應10?min，再注入50?μL、2?U/mL的乙酰膽堿酯酶溶液反應30?min；最后，注入50?μL、1.0?M的乙醇胺溶液反應10?min，用10?mM、pH?8.5的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液沖洗后，制得乙酰膽堿酯酶功能化的SPR傳感界面。

2.根據權利要求1所述的基于磁性分子印跡聚合物放大效應的SPR傳感器構建，其特征在于步驟（3）中，所述的11-巰基十一烷酸溶液用無水乙醇配制。

3.根據權利要求1所述的基于磁性分子印跡聚合物放大效應的SPR傳感器構建，其特征在于步驟（3）中，所述的乙醇胺溶液用濃度為10?mM、pH為8.5的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液配制。

4.根據權利要求1所述的基于磁性分子印跡聚合物放大效應的SPR傳感器構建，其特征在于步驟（3）中，所述的乙酰膽堿酯酶溶液用濃度為10?mM、pH為8.5的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液配制。

5.基于磁性分子印跡聚合物放大效應構建的SPR傳感器在農藥檢測中的應用：其特征在于，將毒死蜱與含有印跡空腔的磁性分子印跡聚合物在室溫下混合并在搖床上震蕩孵育12?h，獲得重結合了毒死蜱的磁性分子印跡聚合物；將其注入SPR檢測池中與傳感界面的乙酰膽堿酯酶反應30?min，然后用蠕動泵將反應溶液排出并注入50?μL、10?mM、pH?8.5的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液進行清洗解離；隨著樣品中毒死蜱濃度的增大，結合到傳感界面的磁性分子印跡聚合物逐漸增多，SPR響應信號逐漸增強，SPR角度變化與毒死蜱濃度在0.001-10?μM范圍內呈良好的線性關系；本發明構建的傳感器對濃度為10?μM毒死蜱檢測的靈敏度比直接檢測法提高了64倍，而且，傳感器只對毒死蜱有良好的響應，而對與毒死蜱結構類似的樂果、撲滅津和殺螟硫磷等農藥幾乎沒有響應，表明本發明構建的傳感器對毒死蜱的檢測具有高靈敏性和良好的選擇性。