[發明專利]一種清肝片的定性定量檢測方法

有效

• 申請號: 201310319584.4
• 申請日: 2013-07-29
• 公開（公告）號: CN104345108B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 郗瑞云;谷陟欣;張妮瑜;歐金秀;辛秀;劉淑妦;袁莉;朱麗
• 申請（專利權）人: 九芝堂股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
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1.一種清肝片的定性定量檢測方法，包括甘草的薄層色譜法的定性鑒別，其特征在于還包括①采用顯微鑒定法鑒別清肝片中板藍根；②采用薄層色譜法，以茵陳藥材為對照藥材，以靛玉紅為對照，鑒別清肝片中含有茵陳和板藍根；③采用高效液相色譜法測定茵陳中綠原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量檢測方法包含如下步驟：

（1）取本品，除去包衣，研細，加水飽和的正丁醇，時時振搖，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0.3~1g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ?B)試驗，吸取上述兩種溶液各5~15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙醇-氨試液=4~6:1.5~2.5:0.5~1.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）取本品粉末，用水合氯醛透化后裝片，置顯微鏡下觀察：網紋導管較多見，網孔較細短，導管直徑7~51?μm；木纖維多成束或單個散在，直徑14~20?μm，微木化，紋孔及孔溝明顯；

（3）取本品，除去包衣，研細，加乙醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取茵陳對照藥材1~3g，同法制成茵陳對照藥材溶液；再取靛玉紅對照品，加乙醇制成溶液；照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ?B)試驗，吸取上述三種溶液各5~15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-丙酮=5~9:0.2~0.7:1.5~3.5為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下檢視，供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以5％氫氧化鉀溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與茵陳對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

（4）甘草酸含量測定：??照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥD)測定；?

色譜條件與系統適用性試驗：?用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.01~0.03mol/L磷酸溶液(30~50:70~50)為流動相；流速為0.5-1.0mL/min；檢測波長為250nm；柱溫25~35℃；理論板數按甘草酸銨峰計算應不低于2000；??????????

對照品溶液的制備：取甘草酸單銨鹽對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含甘草酸銨40μg的溶液，即得（折合甘草酸為39.2μg）；

供試品溶液的制備：取本品，除去包衣，研細，置具塞錐形瓶中，精密加入50~80%乙醇，稱定重量，在功率250W，頻率50kHz條件下超聲處理，放冷，用50~80%乙醇補足減失的重量，搖勻，用濾膜濾過，取續濾液，即得；?????????

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；?

?????本品每片含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)計，不得少于0.4mg；

?（5）綠原酸含量測定：??照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥD)測定：?????

色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.01~0.03mol/L磷酸溶液(5~15:95~85)為流動相；流速為0.5~1.0mL/min；檢測波長為327nm；柱溫25~35℃；理論板數按綠原酸峰計算應不低于5000；??????

對照品溶液的制備：取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含綠原酸0.01mg的溶液；即得；

供試品溶液的制備：取本品，除去包衣，研細，置具塞錐形瓶中，精密加入50~80%乙醇，稱定重量，在功率250W，頻率50kHz條件下超聲處理，放冷，用50~80%乙醇補足減失的重量，搖勻，用濾膜濾過，取續濾液，即得；

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；???

本品每片含茵陳以綠原酸（C₁₆H₁₈O₉）計，不得少于0.12mg。