[發(fā)明專利]一種二價汞離子的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310319387.2
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN103389293A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設計）人: 龍峰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測Hg²⁺濃度的方法，包括如下步驟：

1）將表面修飾了單鏈DNA分子A的倏逝波光纖傳感探頭甲伸入到含一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B的系列不同濃度Hg²⁺的標準溶液中進行反應，使Hg²⁺與所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B上的T-T堿基錯配結(jié)構(gòu)通過離子鍵形成T-Hg²⁺-T復合物，并使未形成T-Hg²⁺-T復合物的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B通過堿基互補配對的方式與所述單鏈DNA分子A相結(jié)合；

檢測所述探頭甲收集到的所述與所述單鏈DNA分子A相結(jié)合的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B發(fā)出的熒光強度信號值；

建立所述標準溶液中Hg²⁺濃度與所述熒光強度信號值的函數(shù)關系式；

2）將所述表面修飾了單鏈DNA分子A的倏逝波光纖傳感探頭乙伸入到含一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B的待測溶液中進行反應，使Hg²⁺與所述單鏈DNA分子B上的T-T堿基錯配結(jié)構(gòu)通過離子鍵形成T-Hg²⁺-T復合物，并使未形成T-Hg²⁺-T復合物的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B通過堿基互補配對的方式與所述單鏈DNA分子A相結(jié)合；

檢測所述探頭乙收集到的所述與所述單鏈DNA分子A相結(jié)合的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B發(fā)出的熒光信號強度值X；

3）將所述熒光信號強度X代入所述函數(shù)關系式中，計算得到所述待測溶液中Hg²⁺濃度；

所述單鏈DNA分子B能與所述單鏈DNA分子A通過堿基互補配對而結(jié)合；所述單鏈DNA分子B上還含有能與Hg²⁺通過離子鍵形成T-Hg²⁺-T復合物的T-T堿基錯配結(jié)構(gòu)，形成T-Hg²⁺-T復合物的DNA分子B不能與單鏈DNA分子A通過堿基互補配對而結(jié)合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述單鏈DNA分子B為序列表序列1所示的單鏈DNA分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述單鏈DNA分子A為序列表序列2和/或3所示的單鏈DNA分子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1—3中任一所述的方法，其特征在于：所述標準溶液和所述待測溶液中的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B的濃度為10～50nmol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1—4中任一所述的方法，其特征在于：所述反應的時間為2—10分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1—5中任一所述的方法，其特征在于：所述標準溶液和所述待測溶液的溶劑為水。

7.根據(jù)權(quán)利要求1—6中任一所述的方法，其特征在于：在步驟1）后、步驟2）前，還包括將所述表面修飾了單鏈DNA分子A的倏逝波光纖傳感探頭甲上的與所述單鏈DNA分子A相結(jié)合的所述一末端經(jīng)熒光素修飾的單鏈DNA分子B去除的步驟，獲得所述探頭乙；

所述去除具體可為用pH為1.9的5g/L的SDS溶液清洗所述探頭甲的步驟。

8.根據(jù)權(quán)利要求1—7中任一所述的方法，其特征在于：所述表面修飾了單鏈DNA分子A的倏逝波光纖傳感探頭甲是按照包括如下步驟的方法得到的：

將所述倏逝波光纖傳感探頭表面硅烷化后，浸入含一末端經(jīng)NH₂-(CH₂)_n-修飾的所述單鏈DNA分子A的溶液Ⅰ中，4℃反應；

所述倏逝波光纖傳感探頭側(cè)壁的表面積與所述溶液Ⅰ中所述一末端經(jīng)NH₂-(CH₂)_n-修飾的所述單鏈DNA分子A的濃度之比為41.4mm²:0.5μmol/L；

所述n為3—10。

9.一種檢測Hg²⁺的試劑或試劑盒，其特征在于：含有序列表序列1所示的單鏈DNA分子，或含有一末端經(jīng)熒光素修飾的序列表序列1所示的單鏈DNA分子。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑或試劑盒，其特征在于：含有序列表序列2和/或3所示的單鏈DNA分子,或含有一末端經(jīng)NH₂-(CH₂)_n-修飾的序列表序列2和/或3所示的單鏈DNA分子，所述n為3—10。