[發(fā)明專利]用免疫層析技術(shù)檢測蛋白的試紙條和方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201310319220.6
• 申請日: 2013-07-28
• 公開（公告）號: CN104345148A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊揮
• 申請（專利權(quán)）人: 嘉興朝云帆生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及納米材料技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、側(cè)流層析技術(shù)等領(lǐng)域。更具體的，本發(fā)明涉及一種用免疫層析技術(shù)檢測蛋白的試紙條；此外，本發(fā)明還涉及一種用免疫層析技術(shù)來檢測蛋白的方法。

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背景技術(shù)

研究發(fā)現(xiàn)很多疾病都有其蛋白標(biāo)志物，疾病的有無、疾病的發(fā)展階段或者疾病的療效都可以通過監(jiān)測其對應(yīng)的蛋白標(biāo)志物來了解，例如：心肌梗塞相關(guān)的蛋白標(biāo)志物心肌脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）、心肌肌鈣蛋白（cTnI）等，腎臟損傷相關(guān)的蛋白標(biāo)志物尿白蛋白，糖尿病相關(guān)的蛋白糖化血紅蛋白。另外，引起食物中毒的金黃色葡萄球菌也可以通過其腸毒素蛋白檢測。不少對人類身體很重要的激素也是蛋白，如生長激素、絨毛膜促性腺激素（HCG）等。食物如肉類或奶中的生長激素過高被人體攝入后會導(dǎo)致青少年發(fā)育不正常，也需要加以檢測，而尿液或血液中的絨毛膜促性腺激素監(jiān)測是檢測生育期婦女是否懷孕的常用簡單方法。

目前檢測這些蛋白標(biāo)志物的的方法主要有酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析、時間分辨熒光免疫分析以及膠體金免疫層析法。其中ELISA、化學(xué)發(fā)光免疫分析、時間分辨熒光免疫分析都要用到昂貴的設(shè)備，需要專業(yè)技術(shù)人員在實(shí)驗(yàn)室中操作，而且操作步驟多，耗時長。膠體金免疫層析法則操作簡單、方便、快速且便宜，但是其靈敏度較低，而且不能定量檢測。因此有必要提供一種快速、方便、簡單且高靈敏度的目標(biāo)蛋白定量檢測方法。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決本領(lǐng)域中的上述各種問題和實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)。具體地，本發(fā)明的目的就是要提供一種方便、快速而且高靈敏度的地檢測樣品中的目標(biāo)蛋白的試紙條和方法。

具體的，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測樣品中的蛋白的試紙條。

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測蛋白的試紙條，包括標(biāo)記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述標(biāo)記物墊含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測抗體，所述捕獲膜含有蛋白捕獲抗體。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是絨毛膜促性腺激素。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是尿白蛋白。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是糖化血紅蛋白。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是生長激素。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是金黃色葡萄球菌腸毒素。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是熒光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述熒光微球是時間分辨熒光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述時間分辨熒光微球是含銪復(fù)合物的熒光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是磷光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述磷光微球是含鉑復(fù)合物的磷光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是二氧化硅微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是聚苯乙烯微球。

在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測蛋白的方法，其特征在于，在權(quán)利要求1所述的試紙條樣品墊上滴加含待測蛋白的樣品，反應(yīng)后檢測光信號。

詳細(xì)說明

用免疫層析技術(shù)檢測樣品中目標(biāo)蛋白的試紙條如圖1示，包括樣品墊1，標(biāo)記物墊2，NC膜3，吸水紙4，塑料底板5。NC膜3上含有C線6和T線7。

其中樣品墊一般為玻璃纖維、濾紙或?yàn)V血膜。標(biāo)記物墊可為玻璃纖維、濾紙或聚酯膜。當(dāng)樣品墊和標(biāo)記物墊材質(zhì)相同時可整合在一起，用一條玻璃纖維、濾紙或聚酯膜來完成樣品墊和標(biāo)記物墊的功能。

所述標(biāo)記物墊上或者含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測抗體，或者同時含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測抗體和生物素標(biāo)記的目標(biāo)蛋白捕獲抗體，還可以含有其他用作陽性對照的光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白或抗體，如鏈親和素或兔抗體。

捕獲膜可以是硝酸纖維素膜（NC膜）、尼龍膜等，所述捕獲膜的T線或者含有蛋白捕獲抗體（雙抗體夾心法），或者含鏈親和素（標(biāo)記物墊同時含光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測抗體和生物素標(biāo)記的目標(biāo)蛋白捕獲抗體），或者含有目標(biāo)蛋白（雙抗原競爭法），C線或者含有能識別蛋白檢測抗體的二抗，或者含生物素標(biāo)記的牛血清白蛋白或卵清蛋白（標(biāo)記物墊含鏈親和素），或者含羊抗兔抗體（標(biāo)記物墊含兔抗體）。