[發(fā)明專利]一種座殼孢菌海藻糖酶分離純化的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310318908.2
• 申請(qǐng)日: 2013-07-27
• 公開（公告）號(hào): CN103409391A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱君志;董冬;涂潔;李小霞;孟麗雪;何肖云;曹麗萍;張以盼;郭慶豐;姚靈丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/24
• 分類號(hào): C12N9/24;C12R1/645
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種座殼孢菌海藻糖酶分離純化的方法，其特征在于包括以下步驟：

（a）粗酶液的制備:?用培養(yǎng)基培養(yǎng)大子座座殼孢菌菌株，在發(fā)酵液中海藻糖酶活性達(dá)最高時(shí)取發(fā)酵液離心，上清液用真空抽濾，收集濾液；向?yàn)V液中加入固體硫酸銨至硫酸銨的飽和度為60%wt，4℃靜置過夜；再次離心收集沉淀，用磷酸鹽緩沖液溶解沉淀；離心溶解液除去不溶物體，上清液裝于透析袋，經(jīng)磷酸鹽緩沖液透析后，再用聚乙二醇PEG20000濃縮得到粗酶液；

(b)?DEAE?Sepharose?fast?flow陰離子交換柱層析:?用磷酸鹽緩沖液平衡過夜DEAE?Sepharose?fast?flow陰離子交換柱層析柱，將粗酶液上樣，再用含0-1mol/L?NaCl的0.02mol/L?pH=6.5的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行連續(xù)洗脫,收集具有酶活性部份；

(c)?Sephadex?G-150分子篩層析:用磷酸鹽緩沖液充分平衡Sephadex?G-150分子篩層析柱，將步驟(b)收集到的具有酶活性部分樣上于其中，再用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫；收集有酶活性的部份；?

步驟?（a）、（b）、（c）中磷酸鹽緩沖液為磷酸鹽緩沖液為0.02mol/L?pH=6.0。

2.根據(jù)權(quán)利1所述的座殼孢菌海藻糖酶的分離純化方法，其特征在于步驟（a）中三次離心轉(zhuǎn)速均為95000?rpm，但首次離心是在常溫下時(shí)間為10?min，后兩次則是4℃條件離心15?min。

3.根據(jù)權(quán)利1所述的座殼孢菌海藻糖酶的分離純化方法，其特征在于步驟（b）中洗脫條件設(shè)置為：流速30?mL/h；5?mL/管。

4.??根據(jù)權(quán)利1所述的座殼孢菌海藻糖酶的分離純化方法，其特征在于步驟（c）中洗脫條件設(shè)置為：流速15?mL/h；5?mL/管。