[發明專利]高效液相色譜法測定多尼培南和/或有關物質的方法

有效

• 申請號: 201310318237.X
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN103389347A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 張驗軍;張燕;張利香;王金玲;任鵬
• 申請（專利權）人: 深圳市海濱制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;李琰

技術領域

本發明涉及藥物分析領域，具體涉及高效液相色譜法測定多尼培南和/或有關物質的方法。

背景技術

多尼培南(Doripenem)，化學名：(+)-(4R,5S,6S)-6-[(1R)-1-羥基乙基]-4-甲基7-氧代-3-[[(3S,5S)-5-[(氨基磺酰氨基)-甲基]-3-吡咯烷基]硫]-1-氮雜雙環[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，結構如(I)所示，由日本鹽野義公司(Shionogi)研發，2005年首次在日本上市，商品名為“Finibax”，屬1-β甲基型碳青霉烯類抗生素，具有廣譜的抗菌活性。

有關物質，也稱為雜質，主要是在生產過程中帶入的起始原料、中間體、聚合體、副反應產物，以及貯藏過程中的降解產物等。碳青霉烯類抗生素中的開環降解物、酸解產物、聚合物等雜質是引起過敏的主要原因。因此，有關物質研究是多尼培南質量研究中關鍵性的項目之一。理想的多尼培南質量檢測方法，應該在保證多尼培南與雜質實現基線分離的同時，分離、檢測到盡可能多的雜質。

現有技術中測定多尼培南含量及純度的方法都使用通用型的C18或C8柱。如中國發明專利申請（公開號CN1432016A）中公開了一種多尼培南的含量測定方法，其采用高效液相色譜儀、紫外吸收光度計、十八烷基硅烷化硅膠（L-column?ODS）色譜柱檢測，色譜條件以對乙酰氨基苯為內標物質，流動相為：pH5.8的2mmol/L磷酸鹽緩沖液/丙烯腈混合溶液（191:9），檢測波長為240nm。

中國發明專利申請（公開號為CN102977101A）公開了多尼培南一水合物純度檢測方法，其HPLC實驗條件/參數：色譜柱為Zorbax?SB-C18，4.6×250mm5μm；流動相為水∶甲醇(90∶10)，加入三乙胺0.3％，以磷酸調節PH5.0；流速為1.5mL/min；檢測波長為220nm；柱溫為30℃；進樣量20μL。

上述兩種方法的不足之處在于：1）所用L-column?ODS和Zorbax?SB-C18色譜柱都采用通用型十八烷基硅烷鍵合硅膠填料（Octadecylsilyl，簡稱ODS）。在流動相含水量高的情況下會發生C18層鏈倒伏塌陷，損失柱效和壽命；2）主峰與雜質峰、雜質與雜質之間不能實現良好的分離，結果不準確，不能用于有關物質的檢測；3）使用內標物質，操作繁瑣。

公開號為CN101191787A的中國發明專利申請還公開了一種多尼培南含量測定的方法，其采用高效液相色譜法、紫外檢測器、辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱檢測（C8柱），流動相為pH為5.0～6.0的0.01～0.2mol/L的磷酸鈉鹽水溶液/乙腈混合溶液（100:10～100:1），檢測波長為292nm。該方法的不足之處在于：1）主峰與雜質峰、雜質與雜質之間不能實現良好的基線分離，測定結果不準確；2）多尼培南出峰時間不穩定，批間相差約5min，不利于雜質研究。3）該方法不適用于多尼培南有關物質的測定。

因此，現有技術中利用高效液相色譜法測定多尼培南的方法，存在主峰與雜質峰、雜質與雜質之間不能實現良好的基線分離，批間多尼培南出峰時間不穩定，批與批之間和柱與柱之間的重現性差，測定結果不準確的缺陷，且缺少能用于測定有關物質的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種高效液相色譜法測定多尼培南和/或有關物質的方法。該方法實現了批間多尼培南吸收峰保留時間穩定、各峰良好的基線分離，從而使測定結果準確，并能同時測定多尼培南及有關物質的含量。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種高效液相色譜法測定多尼培南和/或有關物質的方法，采用紫外檢測器進行測定，所述方法采用的固定相為鍵合極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠。

優選的，所述固定相選自鍵合極性基團的八烷基硅烷鍵合硅膠或鍵合極性基團的十八烷基硅烷鍵合硅膠；優選為鍵合極性基團的十八烷基硅烷鍵合硅膠。

優選的，本發明所述方法的色譜柱選自ODS-AQ色譜柱、Polar-RP色譜柱、Hydro-RP色譜柱或AQ-C18極限柱。

更優選的，本發明所述方法采用的色譜柱選自優選Ultimate?AQ-C18柱，Welch?Polar-RP?C18色譜柱，ZORBAX?SB-Aq?C18色譜柱，YMC-Pack?ODS-AQ?C18色譜柱，ProntoSIL?C18AQ色譜柱，CenturySIL?C18AQ色譜柱，Synergi?Hydro-RP?C18色譜柱或Vertex?AQ-C18色譜柱；更優選Welch?Polar-RP?C18色譜柱。