[發明專利]一種人細胞色素酶P450基因多態性檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310317804.X
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN103509858A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 王巍;劉琪琦;林曉云;李洪強;李洪生
• 申請（專利權）人: 北京普利耐特生物科技有限公司;中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/06
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測人細胞色素酶P450基因多態性的試劑盒。

背景技術

人細胞色素P450酶（CYP）是定位在內質網膜（微粒體）上的一類結合有亞鐵血紅素的蛋白。CYP酶系是由超基因家族編碼的一組結構與功能相關的同工酶，該酶系能夠催化許多不同類型的氧化反應，包括羥基化、環氧化、雜環原子氧化、雜環原子脫烷基化、氧化基團遷移、脫酯化和脫氫反應。因此該酶家族是人體中重要的一類單氧化酶,在體內發揮著許多功能,特別在藥物代謝過程中具有重要作用,是人體內主要的藥物代謝酶。

大量的研究結果表明，細胞色素P450酶系的基因多態性在個體對藥物的代謝及處置、對環境毒物的敏感性、以及與代謝相關的疾病發生等方面都有著重要的影響。細胞色素P450酶系也已經成為了臨床上指導個體化給藥，研究毒物暴露引起的疾病，以及遺傳代謝相關疾病的重要生物標記物。

CYP有多個亞家族，其中CYP2C9是第二亞家族中的一個重要成員，占肝微粒體P450蛋白總量的20%。CYP2C9能羥化代謝許多不同性質的藥物，主要是酸性底物。據統計，目前約有16%的的臨床藥物由CYP2C9負責代謝。CYP2C9的基因頻率在不同人種和不同民族之間差異很大。在中國人口中,除了野生型CYP2C9*1，已發現的最主要的基因型是CYP2C9*3，其基因頻率約為3.3%。CYP2C19也是CYP450酶第二亞家族中的重要成員，是人體重要的藥物代謝酶，在肝臟中有很多表達。CYP2C19具有很多基因多態（SNP)位點，最常見的是CYP2C19*2和CYP2C19*3。

因此，分析CYP2C9和CYP2C9基因多態性可推斷代謝表型，從而預測解毒能力和患病風險，在臨床研究上意義重大。可見，尋求一種能夠快速檢測識別CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因的方法在實現上述目的時尤為重要。

發明內容

為實現上述目的，本發明提供了一種用于快速檢測人細胞色素酶P450（CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3）基因多態性的試劑盒。

本發明的另一個目的是上述試劑盒在檢測CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因多態性上的應用。

為了實現以上目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供一種基因芯片，該基因芯片上連接有CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特異檢測探針。

上述基因芯片上連接的CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特異檢測探針是：

CYP2C9*3野生型??ACTCATCACGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；

CYP2C9*3突變型??ACTCATCATGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；

CYP2C19*2野生型??GATGGCCAGCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；

CYP2C19*2突變型??GATGGCCATCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；

CYP2C19*3野生型??CAACCCCCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT；

CYP2C19*3突變型??ACCCCCACCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT。

上述基因芯片上還連接有質控探針，該質控探針是：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT。

本發明還提供包含上述基因芯片的一種用于人細胞色素酶P450基因多態性的檢測試劑盒。

本發明的試劑盒還包括以下部分：PCR反應液，酶混合物（Emix），野生型質控品，突變型質控品，陰性對照，雜交液，標記液，洗滌母液A，洗滌母液B，洗滌母液C，顯色液A，顯色液B。

上述試劑盒各部分的組分與配比如下：

PCR反應液：KCl，Tris-HCl緩沖液，MgCl2，NTP,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特異引物對的混合液

酶混合物（Emix）：Taq酶

野生型質控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3野生型基因的重組DNA片段

突變型質控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3突變型基因的重組DNA片段

陰性對照：TE緩沖液

雜交液：8×SSC，0.2%SDS，甲酰胺

標記液：辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素復合物