[發明專利]微量全血加樣法檢測肺炎支原體膠體金試劑盒

有效

• 申請號: 201310317648.7
• 申請日: 2013-07-25
• 公開（公告）號: CN103389374A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 楊致亭;王秀利;王春光;孟凡杰;楊勤德;楊明霞
• 申請（專利權）人: 濰坊市康華生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 濰坊正信專利事務所 37216
• 代理人: 王偉霞

技術領域

本發明涉及生物學檢測技術領域，具體為一種微量全血加樣法檢測肺炎支原體膠體金試劑盒。

背景技術

肺炎支原體(Mycoplasma?pneumonia，簡稱MP)是急性呼吸道感染的一種常見病原微生物，是引起小兒下呼吸道感染的重要病原之一。兒童時期感染肺炎支原體，首先引起急性呼吸道感染，并可在呼吸道感染的基礎上并發肺外多系統器官的疾病，已引起廣泛關注。近年來，嬰幼兒支原體肺炎發病率在逐年增加。據統計，支原體肺炎占嬰幼兒肺炎的比率也在不斷上升，由2006年的10％～20％升至33.16％，在我國社區獲得性肺炎中占據著重要地位。

目前常用的診斷方法有代謝抑制試驗、補體結合試驗和酶聯免疫法等，代謝抑制試驗、補體結合試驗和酶聯免疫法操作繁瑣，需要一些大型的儀器設備，需專門人員操作實驗，使用不方便。

隨著膠體金技術的發展，肺炎支原體抗體檢測試劑具有快捷方便、安全、結果準確的特點。但是，現有技術膠體金法檢測肺炎支原體抗體，一方面檢測樣本往往需要量多，如國內專利《一種卡式肺炎支原體抗體檢測試劑盒》（專利號：ZL?200720021684.9）血清用量為150μL；國內專利《一種肺炎支原體抗體試紙條》（專利號：ZL?200720021685.3）血清用量為80μL，對于嬰幼兒來說，只能指尖取血，而指尖取血量最多不超過40μL，但是嬰幼兒較成人來說，更易受到肺炎支原體的感染；另一方面，檢測人員還需要對血樣進行血清和血漿分離處理才能進行檢測，這使得檢測相對繁瑣。因此，開發出一種可以克服膠體金診斷試劑樣本量多、采血量較大等缺點的試劑盒是十分必要的。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種微量全血加樣法檢測肺炎支原體膠體金試劑盒，以解決膠體金法診斷肺炎支原體時使用試劑樣本量多、采血量較大等問題。

為解決上述技術問題，本發明提供了以下技術方案：

包括盒體，所述盒體內設有檢測卡，所述檢測卡包括殼體和封裝于所述殼體內的試劑條，所述試劑條包括底板，所述底板上依次設有首尾相接的吸水濾紙、硝酸纖維素膜和樣品墊，所述樣品墊由上之下依次包括保護墊和膠體金層：

所述硝酸纖維素膜上設有分別包被有MP蛋白的檢測線和包被有抗鼠IgG抗體的參照線，所述檢測線采用MP蛋白濃度為0.8～1.0mg/mL的包被液進行包被，所述參照線采用抗鼠IgG抗體濃度為1.0～1.5mg/mL的包被液進行包被；

所述膠體金層上的膠體金顆粒粒徑為27納米～30納米；

所述盒體內還配有樣品稀釋液。

優選的，在所述樣品墊上、所述保護墊和膠體金層之間還設有滲濾層。

更進一步的，所述滲濾層為經表面活性劑浸泡、烘干后制得的玻璃纖維墊。

作為一種優選的方式，所述滲濾層為經1wt%Triton?X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纖維墊。

優選的，所述膠體金顆粒采用如下方法制得，先將1wt%氯金酸水溶液加熱至沸騰，再按0.7～0.9%的體積比滴加加入1wt%檸檬酸三鈉溶液，混勻，繼續沸煮，待膠體金溶液顏色由藍經灰變紫后，停止加熱并冷卻。

優選的，所所述MP蛋白為基因重組MP蛋白。

優選的，所述抗鼠IgG抗體為羊抗鼠IgG抗體。

優選的，所述樣品稀釋液為20mM?PBS緩沖液。

采用了上述技術方案后，本發明的有益效果是：

1、采血量微小，尤其適合嬰幼兒的MP檢測，本發明僅需30μL全血即可進行檢測，可采取指尖取血，徹底解決了嬰幼兒取血困難的問題，推廣應用前景廣闊；

2、試劑質量穩定，本發明由于采取了增大膠體金顆粒和提高檢測線包被濃度的措施，將膠體金顆粒粒徑由18納米～20納米增加至27納米～30納米，MP蛋白包被液濃度由0.4～0.5mg/mL增加至0.8～1.0mg/mL，以增加蛋白的標記量、減少血樣用量，但是，這會導致結果出現假陽性，所以本發明同時配備全血稀釋液，以消除假陽性干擾，確保了試劑的準確性；

3、本發明檢測的是MP-IgM抗體，MP-IgM是感染肺炎支原體早期出現的抗體，而MP-IgG是晚于MP-IgM出現的抗體且持續時間相對較長，IgM抗體僅與急性感染有關，一旦檢測出特異性IgM抗體陽性，可立即采取措施，做到臨床早期診斷，早期預防，早期治療；