[發明專利]胞質多聚腺苷酸化成分結合蛋白4的HLA-A*0201限制性CTL表位及其應用

無效

• 申請號: 201310314445.2
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103360465A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 楊曌;楊清武
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及一種抗原細胞毒性T細胞（CTL）表位及其在制藥領域中的應用。?

背景技術

膠質瘤是最常見的原發性顱內腫瘤，約占中樞神經系統腫瘤的31%，且近30年來發生率逐年遞增。其中，惡性膠質瘤（WHO分類III、IV級）約占所有膠質瘤的77.5%，是34歲以下腫瘤患者的第二位死亡原因，其5年病死率在全身腫瘤中列第三位，僅次于胰腺癌和肺癌。膠質瘤最大的生物學特性是腫瘤細胞呈浸潤性生長，難以清除完全，術后易復發。目前治療的主流方案是以手術為主的綜合治療，即先行手術切除腫瘤，術后加以放療、化療、生物靶向治療等輔助治療。?

腫瘤特異性免疫治療由于不傷及無關正常組織，是近年來發展迅速的腫瘤治療方法。其基本原理是腫瘤抗原多肽在抗原提呈細胞（APC）的作用下以MHC-I-肽復合物的形式被提呈于APC表面（與MHC-I類分子結合的抗原多肽被定義為CTL表位），CTL通過其T細胞受體特異識別APC表面的MHC-I-肽復合物而得以活化，最終特異識別存在于腫瘤細胞表面的抗原多肽而特異殺傷腫瘤細胞。因此，尋求特異腫瘤抗原及其相應的CTL表位是腫瘤特異性免疫治療的關鍵。?

胞質多聚腺苷酸化成分結合蛋白（CPEBs）是一組介導mRNA胞質多聚腺苷酸化和翻譯的RNA結合蛋白。近年來，人們發現其在大多數腫瘤細胞中有異常表達現象。胞質多聚腺苷酸化成分結合蛋白4（CPEB4）是CPEBs家族中的一員。文獻報道，CPEB4能激活與腫瘤發育有關的數百個基因，將健康細胞變成癌細胞，因此抑制CPEB4有望為治療癌癥開辟全新途徑。?

由于HLA-A*0201是中國人群最為常見的HLA-I類分子的型別，陽性率高達50%，同時也是北美高加索人種最常見的HLA-I類分子的型別，陽性率高達98%。因此，鑒定出腫瘤特異抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位，將會為中國人群和北美高加索人群中的惡性腫瘤患者提供免疫治療的基礎。?

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位，從而?為中國人群和北美高加索人群中CPEB4表達異常升高的惡性腫瘤患者提供免疫治療的基礎；目的之二在于提供CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位在制藥領域中的應用。?

為達到上述目的，經研究，本發明提供如下技術方案：?

1.CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1、SEQ?ID?No.2或SEQ?ID?No.3所示。?

2.CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位在制備膠質瘤治療性肽疫苗中的應用。?

本發明的有益效果在于：本發明提供了CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位，該CTL表位能夠以高親和力結合HLA-A*0201，所形成的復合物穩定，能夠誘導肽特異性的CTL應答，刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN-γ，并對膠質瘤細胞產生特異性殺傷效應，從而為中國人群和北美高加索人群中CPEB4表達異常升高的膠質瘤患者提供了免疫治療的基礎，其可用于制備膠質瘤治療性肽疫苗，在膠質瘤特異性免疫治療領域有著潛在、良好的開發應用前景。?

附圖說明

為了使本發明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發明提供如下附圖進行說明：?

圖1為CTL表位P1與HLA-A*0201的復合物模型。?

圖2為CTL表位P2與HLA-A*0201的復合物模型。?

圖3為CTL表位P3與HLA-A*0201的復合物模型。?

圖4為CTL表位P1的分子動力學模擬構象。?

圖5為CTL表位P2的分子動力學模擬構象。?

圖6為CTL表位P3的分子動力學模擬構象。?

圖7為CTL表位肽P1、P2、P3與HLA-A*0201的親和力檢測結果。?

圖8為CTL表位肽P1、P2、P3與HLA-A*0201的復合物穩定性檢測結果。?

圖9為CTL表位肽P1、P2、P3刺激肽特異性CTL殺傷靶細胞的能力檢測結果。?

圖10為CTL表位肽P1、P2、P3刺激肽特異性CTL分泌IFN-γ的能力檢測結果。?

具體實施方式

下面將結合附圖，對CPEB4的HLA-A*0201限制性CTL表位的結構及其活性進行詳細的描述。?