[發明專利]猴耳環提取物及其在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310314032.4
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103385912A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 王永剛;劉博宇;蘇薇薇;姜儻;李泮霖;劉賽娟
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K36/48
• 分類號: A61K36/48;A61P31/04;A61K127/00;A61K135/00
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

技術領域

本發明屬中藥制藥領域，涉及中草藥猴耳環(Pithecellobium?clypearia?Benth.)?提取物的新用途。?

背景技術

眾所周知，當前細菌耐藥已成為全球范圍的重大公共健康問題，抗生素的濫用是造成細菌耐藥的重要原因。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌?(Methicillin-resistant?Staphylococcus?aureus，以下簡稱“MRSA”)具有多重耐藥性并伴有高發病率和高死亡率，是導致壞死性肺炎、嚴重敗血癥、壞死性筋膜炎等疾病的重要致病菌，是醫院感染和社區感染的重要病原菌之一，給臨床治療帶來了極大的困難。MRSA對絕大多數的抗菌藥耐藥，甚至對目前臨床抗耐藥菌最為有效的萬古霉素也開始出現耐藥，一旦MRSA發展到對萬古霉素普遍耐藥的程度，感染MRSA的患者將面臨無藥可治的危險境地。因此，針對細菌耐藥日趨嚴重的情況，尋找、開發具有抗耐藥菌MRSA、對抗生素具有增敏作用的抗菌藥物，刻不容緩。?

猴耳環為含羞草科猴耳環屬植物猴耳環(Pithecellobium?clypearia?Benth.)的干燥幼枝及葉，是兩廣地區常用的中草藥，用于治療上呼吸道感染、急性咽喉炎、細菌性痢疾等疾病。目前有文獻公開猴耳環的水及乙醇的單純提取液具有抗病毒作用，但對上述提取液的其他用途或其他方法制備的提取物的藥物應用則沒有報道。?

發明內容

本發明的目的是開發猴耳環在制藥領域上的新用途。?

目的之一是，將猴耳環水或乙醇或乙醇水溶液提取物用于制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物和抗生素抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌增敏藥物。?

目的之二是，進一步優化猴耳環水或乙醇或乙醇水溶液提取物，開發活性更強的提取物。?

目的之三是，公開上述提取物的制備方法。?

本發明的技術方案：?

一、本發明所述猴耳環提取物的制備方法，包括以下步驟：?

1.取猴耳環藥材，用水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶劑得浸膏，制得猴耳環水提取物或乙醇提取物或乙醇水溶液提取物。?

2.上述浸膏加水稀釋，再用石油醚或乙酸乙酯或正丁醇萃取，取萃取液濃縮分別制得對應的猴耳環提取物。此提取物的成分進一步優化，其藥效明顯提高。制備中涉及的藥材重量與溶劑體積比的單位，藥材重量以克計，溶劑體積以毫升計。?

二、將上述猴耳環提取物作為活性成分應用于抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌藥物的制備。?

三、將上述猴耳環提取物作為活性成分應用于抗生素抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌增敏藥物制備。特別是作為紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星抗MRSA組合藥物的增敏劑。?

本發明通過對猴耳環進行提取和分離，對各提取物抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的藥理作用進行篩選，并進行聯合藥敏試驗，來考察猴耳環抗MRSA及其對抗生素抗MRSA的增敏作用。實驗結果顯示：猴耳環水、10%乙醇、?30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇提取物及相應乙酸乙酯、正丁醇和水層萃取物均具有較強的抗MRSA作用，其中猴耳環60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物活性最強，相對于不經萃取的水提取物的抗菌作用強4倍；猴耳環60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物對紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星抗MRSA具有增敏作用。?

本發明通過下述方法對猴耳環提取物的抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的藥理作用進行篩選。?

以微量肉湯稀釋法測定猴耳環提取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。?

菌株：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA，編號為M1-M20)臨床分離株20株；金黃色葡萄球菌標準菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大學附屬第一醫院檢驗醫學部臨床微生物檢驗室提供，經中山大學附屬第一醫院臨床微生物檢驗室檢測確認其耐藥性。?

MH肉湯培養基：MH肉湯干粉(英國?OXOID?LTD.)2.1g，定容至100ml，NaOH調節pH至7.0，高壓滅菌，置4℃冰箱備用。?

方法：參照美國國立臨床試驗標準化委員會(NCCLS)推薦的微量肉湯稀釋法操作。?

本發明通過下述方法對猴耳環提取物對紅霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的增敏作用進行考察。?