[發明專利]用于凝膠電泳蛋白質顯色的試劑及使用方法和應用

有效

• 申請號: 201310313768.X
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103424400A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 汪弋
• 申請（專利權）人: 汪弋
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

技術領域

本發明涉及一種蛋白質顯色試劑及方法，特別是涉及一種用于凝膠電泳蛋白質顯色的試劑及使用方法和應用。

背景技術

蛋白質的凝膠電泳是生命科學研究中最常用的實驗方法之一。在蛋白質的凝膠電泳實驗中，必須使用染色劑使蛋白質染上醒目的顏色，便于觀察結果。現在常用的染色方法如考馬斯亮藍染色法、銀染法等，需要在蛋白質的凝膠電泳結束之后對凝膠進行固定、染色、脫色等繁瑣處理才能觀察，耗時長，不可能快速知曉實驗結果，也不便于在實驗過程中觀察結果。且固定、染色、脫色需要大量試劑（尤其是有機溶劑）浸泡凝膠，使用量很大，增加了對環境的污染。對于以上情況，現有的改進方法有：1)使用微波爐加熱以加快反應速度；2)調整染色液配方以提高染色效率等。但是以上的方法都沒有從本質上改變凝膠電泳實驗中蛋白質染色步驟繁瑣、污染嚴重等問題，而且染色仍然必須在電泳結束后才能進行。

故而，需要一種同時具備可靠性、可推廣性、快速簡便、無污染性的凝膠電泳蛋白質顯色方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于凝膠電泳蛋白質顯色的試劑及使用方法和應用。本發明中的采用該試劑的顯色方法有別于傳統凝膠電泳中蛋白質染色方式的蛋白質顯色方法，而且本發明的顯色方法彌補了幾種傳統染色方式的不足，而且在電泳環境下很穩定。

為解決上述技術問題，本發明的用于凝膠電泳蛋白質顯色的試劑（快速顯色劑），其組分包括：第一組分和第二組分；

其中，第一組分是將帶異硫氰酸基團（—NCS）的化合物溶解于保護異硫氰酸基團（—NCS）的溶劑中所形成的溶液，即帶異硫氰酸基團（—NCS）的化合物溶液；

第二組分是不含伯氨基（—NH₂基團）的堿性上樣緩沖液。

所述帶異硫氰酸基團（—NCS）的化合物，是帶異硫氰酸基團（—NCS）的色素或者熒光素，包括：異硫氰酸熒光素（FITC）和四甲基異硫氰酸羅丹明（Tetramethyl?Rhodamin?Isothiocyanate，TRITC）等。

所述保護異硫氰酸基團（—NCS）的溶劑，包括：N,N-二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亞砜（DMSO）等。

所述第一組分的濃度推薦為0.08～0.12g/100mL（如0.1g/100mL）或者飽和濃度以下的其他濃度，視色素或熒光素的種類不同而不同。

所述第二組分，可采用常規的不含伯氨基（—NH₂基團）的堿性緩沖液即可，如可采用pH8～10的不含伯氨基（—NH₂基團）的堿性上樣緩沖液（緩沖體系濃度優選為100mM以上），如包括：pH8～10的硼酸-氫氧化鈉緩沖液（緩沖體系濃度優選為100mM以上）或pH7.5～8.5的磷酸鹽緩沖液（緩沖體系濃度優選為100mM以上）及其他緩沖液。

其中，pH8～10的硼酸-氫氧化鈉緩沖液的配方（100ml）如下：

將20ml1M?pH8～10硼酸-氫氧化鈉緩沖液（即Na₂B₄O₇-NaOH）、2mlβ-巰基乙醇、4g?SDS（十二烷基磺酸鈉）、0.1g?EDTA（乙二胺四乙酸）、20ml甘油混勻，并定容至100ml或將20ml1M?pH8～10硼酸-氫氧化鈉緩沖液、2g二硫蘇糖醇、4g?SDS、0.1g?EDTA、20ml甘油混勻，并定容至100ml。

pH7.5～8.5的磷酸鹽緩沖液的配方（100ml）如下：

將20ml1M?pH7.5～8.5磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、2mlβ-巰基乙醇、4g?SDS、0.1gEDTA（乙二胺四乙酸）、20ml甘油混勻，用3M氫氧化鈉溶液將pH調回7.5～8.5，并定容至100ml或將20ml1M?pH8～10磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、2g二硫蘇糖醇、4g?SDS、0.1g?EDTA、20ml甘油混勻，用3M氫氧化鈉溶液將pH調回7.5～8.5，并定容至100ml。

另外，本發明還公開了用于凝膠電泳蛋白質顯色的試劑（快速顯色劑）在凝膠電泳蛋白質顯色中的使用方法，包括：

I、方法A，其步驟包括：

（1）將第一組分與第二組分按比例進行混合，形成處理液；

其中，不同的帶異硫氰酸基團的化合物（即帶異硫氰酸基團的色素或熒光素）所需要的混合比例不同，如可根據待測蛋白樣品濃度進行調整，以蛋白摩爾數略低于所加含有異硫氰酸基團（—NCS）的色素或熒光素為最宜，也可以自行摸索；