[發明專利]一種腫瘤抗原的制備方法

無效

• 申請號: 201310312658.1
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103357001A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 顧宇春
• 申請（專利權）人: 顧宇春
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫醫學領域，具體而言，本發明涉及腫瘤抗原、其制備和應用等。?

背景技術

細胞生物治療是運用自身免疫系統的新型癌癥治療方法，具有顯著療效的治療模式。它運用分子生物學技術和細胞工程學技術，用生物制劑對從病人體內采集的細胞在體外進行培養和處理，再回輸到病人體內，從而激發、增強機體自身的免疫功能，達到監視并殺滅病變細胞或修復受損細胞的目的。?

目前已經有大量相關文獻報道了采用細胞生物治療來處理患者腫瘤。例如，中國專利01139230.4報道了一種治療腫瘤的自體免疫細胞及其制備方法，包括制備自體腫瘤組織mRNA；由自體血分離制備單核細胞；加細胞因子誘導擴增抗原遞呈細胞；再用腫瘤mRNA轉染抗原遞呈細胞即得負載腫瘤抗原的抗原遞呈細胞，亦即治療腫瘤的自體免疫細胞。?

又如，中國專利200710139687.7報道了一種自體大腸癌疫苗的制備方法，包括以下步驟，DC體外誘導培養，獲得成熟的DC；取自體大腸癌細胞，得到腫瘤抗原備用；用制備好的腫瘤抗原和制備好的DC混合培養24h，以獲得自體大腸癌抗原修飾的DC，再將DC和淋巴細胞按照1∶10～1000的數量比例混合培養。?

然而，現有技術制備的腫瘤抗原，使用效率低，無法直接使用，而且經過大量后期處理，容易使得抗原本身降解或者失活，特異性抗原容易丟失。為此，本發明人經過努力摸索，令人意外地發現腺病毒等病毒裂解腫瘤細胞而產生的碎片均勻且具有強免疫原性，非常適合作為腫瘤抗原，因此研究出了新的腫瘤抗原的制備方法，所獲得腫瘤抗原可以直接體內使用，療效穩定而活性高，也可以體外完成DC等細胞的致敏。?

發明內容

本發明的要解決的技術問題在于提供新的腫瘤抗原、其制備和應用，使得治療(尤其是直接治療)腫瘤的療效得以提高。?

具體而言，在本發明的第一方面，本發明提供了一種腫瘤抗原的制備方法，其包括：?

(1)向培養基中接種腫瘤細胞，并進行培養；?

(2)向步驟(1)獲得的培養產物中接種細胞裂解性病毒，并進行培養；和，?

(3)取步驟(2)獲得的培養上清液，并分離出分子量不小于20kDa(優選不小于25kDa，如30kDa)的物質作為腫瘤抗原。?

本發明的第一方面的方法是體外方法，不涉及對活體動物(包括人)的處理步驟。因此優選本發明的第一方面的方法不包括獲取腫瘤細胞的步驟。腫瘤細胞可以來自培養的腫瘤細胞，購買的腫瘤細胞，或者基于知情同意原則而由醫生或者患者提供的腫瘤細胞。?

優選在本發明的第一方面的方法中，腫瘤是實體瘤，更優選是肝腫瘤、肺腫瘤、乳腺腫瘤、皮膚腫瘤、子宮頸腫瘤、腦腫瘤、鼻咽腫瘤和/或胃腫瘤，如肝腫瘤和/或乳腺腫瘤。?

優選在本發明的第一方面的方法中，培養的條件是35～38℃和4.5～6％CO₂，優選是37℃和5％CO₂。該培養的條件分別適用于步驟(1)和步驟(2)的培養。這兩個步驟的培養的條件可以是不同的，優選是相同的。?

優選在本發明的第一方面的方法中，步驟(1)的培養的時間是培養至貼壁細胞產生，通常，該時間為4～7天，如5天。?

能夠侵入(腫瘤)細胞并使得細胞死亡裂解的病毒，都可以作為本發明的細胞裂解性病毒，如腺病毒。為了避免收集的上清液中存在復制產生的活病毒，產生安全性問題，優選在本發明的第一方面的方法中，細胞裂解性病毒是復制缺陷型腺病毒。當前，已經有許多安全的復制缺陷型腺病毒商品化了，可以方便地從市場上購買獲得。?

優選在本發明的第一方面的方法中，細胞裂解性病毒的接種量為0.1～10x10?¹¹/ml，優選為0.8～2x10¹¹/ml，如1.0x10¹¹/ml。?

步驟(2)的培養的時間要使得細胞裂解性病毒全部侵入(腫瘤)細胞并導致細胞裂解，通常需要20小時以上。優選在本發明的第一方面的方法中，步驟(2)的培養的時間為24～72小時，優選為45～55小時，如48小時。?

在第二方面，本發明提供了本發明的第一方面的方法制備的腫瘤抗原。該腫瘤抗原可以直接作為腫瘤疫苗而在臨床上預防或治療患者的腫瘤，也可以如現有技術那樣，在體外使得DC細胞或其他免疫細胞的致敏或活化，然后再用于預防或治療患者的腫瘤。該腫瘤抗原可以應用于來源的患者本人(即，個性化治療)，也可以應用于患有同類型腫瘤的其他患者。?