[發明專利]一種重金屬抗性果膠桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201310312329.7
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103409346A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 劉彤;侯進慧
• 申請（專利權）人: 徐州工程學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/68;B01J20/22;C22B7/00;C12R1/01
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

技術領域

本發明屬于生物化工領域，具體涉及一種重金屬抗性果膠桿菌及其應用。?

背景技術

隨著人類社會工業經濟的發展和農業生化用品的增加，重金屬污染的問題日漸尖銳，已經成為全球關注的重大環境問題之一。重金屬污染會造成農田土壤肥力退化，農產品品質降低，而且加快環境水質惡化，并通過食物鏈，最終影響到人類健康。鎘是一種毒性很大的重金屬，其化合物也大都屬于毒性物質。鎘用途很廣，顏料、合金、電鍍、電池、冶金等都要用到鎘。隨著現代工農業生產的發展,“三廢”的排放、污水灌溉及農藥、除草劑和化肥的使用越來越多,土壤中鎘的含量顯著增加,土壤-植物-環境系統中的Cd污染問題日趨嚴峻,從而使農產品的安全性受到嚴重威脅。正是由于這樣一些原因，國際和國內對于重金屬污染及其防治的研究已經成為環境、化學、生命科學等相交叉的重點和熱點研究領域，相關應用性研究側重于分析重金屬污染的來源、防治措施和環境修復等方面。?

目前國內外治理重金屬污染，主要采用離子交換、化學沉淀、溶劑提取等傳統的物理化學方法。由于需要復雜的設施設備以及破壞土層結構，物理化學修復法的投資成本較高，并且它們還會影響土壤本生的母質性質甚至會破壞土壤生物的多樣性，所以對于大面積受污染的土壤不宜使用。然而，生物修復技術因其獨有的優勢逐漸被推到人面的關注范圍之內。生物修復是指一切以生物為主體來治理環境污染的技術。它包括利用動物、植物和微生物吸收、轉化、降解土壤和水體中的污染物，使環境中污染物的濃度降低，或將污染物轉化為其他無污染物質，以及使污染物穩定化，避免其向環境中擴散。在環境保護研究方面，微生物修復也成為很多研究者的興趣所在。針對微生物對重金屬抗性和富集的研究是利用微生物修復重金屬污染的一個很好的途徑。因為這方面的研究既可以為微生物修復重金屬污染提供技術支持，也能促進人們弄清楚微生物對重金屬抗性的機理，從而更好地進行環境修復和生態保護。利用果膠桿菌開展重金屬吸附的應用開發未見他人報道，本專利提供一株重金屬抗性果膠桿菌及其在重金屬吸附中的應用。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種重金屬抗性果膠桿菌及其應用。將菌種活化后可用于重金屬吸附劑，對重金屬鎘最大吸附量達到113mg/L。該菌可用于制作重金屬吸附劑，在重金屬修復和回收方面有應用價值。?

本發明的技術方案是：一種重金屬抗性果膠桿菌，所述菌株在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為：CGMCC?NO.7794；保藏日期2013年6月21日，分類命名為：堅固桿菌，Pectobacterium?sp.，菌株16S?rDNA序列如SEQ?ID?NO.1所述，保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。?

上述重金屬抗性果膠桿菌的制備方法為：?

（1）從土壤中分離樣品，樣品加入100mLLB液體培養基中，在250mL錐形瓶中，以120r/min轉速于28℃培養48h涂布于LB固體平板上，獲得菌株;所述LB液體培養基組分為：每1L蒸餾水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g；所述LB固體平板組分為：每1L蒸餾水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g瓊脂粉12g；?

（2）將菌落接種于含鎘篩選培養基，在培養箱中培養2d，篩選抗鎘細菌，所用的培養基為：每1L培養基中含有50mg/L，蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g，瓊脂粉12g，以蒸餾水補足體積至1L；?

（3）不斷提高培養基中鎘濃度直至Cd²⁺濃度為2000mg/L，獲得耐鎘菌株。?

（4）對細菌16S?rDNA基因克隆和序列分析；用于克隆細菌16S?rDNA基因的上游引物序列為：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG,下游引物序列為：GGTTACCTTGTTACGACTT。?

本發明的有益效果是:用含有Cd²⁺濃度為2000mg/L的篩選培養基，從土壤中篩選并鑒定本發明的重金屬抗性果膠桿菌NP22。將菌種活化后可用于重金屬吸附劑，對重金屬鎘最大吸附量達到113mg/g。該菌可用于制作重金屬吸附劑，在重金屬修復和回收方面有應用價值。?

附圖說明

圖1是果膠桿菌NP22的菌落圖片。?

圖2是細菌16S?rDNA的瓊脂糖凝膠電泳圖。（左邊是Marker：D2000，從上到下一次大小為2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp；右邊是16SrDNA）。?

具體實施方式

1、材料?