[發明專利]一種高純度萬古霉素的制備方法

有效

• 申請號: 201310311871.0
• 申請日: 2013-07-23
• 公開（公告）號: CN103408639A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 黃志強;呂述權;黃娟;林東態;魏華;陳秉梅
• 申請（專利權）人: 麗珠集團福州福興醫藥有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/22
• 代理公司: 福州市鼓樓區博深專利代理事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

技術領域

本發明涉及抗生素生產技術領域，具體涉及一種高純度萬古霉素的制備方法。

背景技術

萬古霉素是東方諾卡氏菌在控制發酵條件下產生的一種兩性糖肽類抗生素，其化學式為C₆₆H₇₅C_l2N₉O₂₄，分子量為1486。通過微生物Amycolatopis?orientalis發酵制備萬古霉素的方法已經在美國專利US3,067,099（1995年申請）和W091/08,300中更為詳細的描述。萬古霉素是目前治療盤尼西林耐藥菌感染者和β-內酰胺類抗生素過敏癥的首選藥，被國際抗生素專家譽為“人類對付頑固性耐藥菌株的最后一道防線”。

萬古霉素最初的外號叫“密西西比污泥”，因為其早期制劑的外觀呈灰褐色，純度只有70%左右，雜質多是其不良反應比較多的原因。據研究表明純度95%的萬古霉素的紅人綜合征發生率為3.4%，純度81-89%的萬古霉素的紅人綜合征發生率為30%；高純度的萬古霉素輸注后皮疹發生率為1.7%，相對的，低純度的萬古霉素輸注后皮疹發生率為14.4%，因此提高萬古霉素的純度可以有效的降低不良反應的發生。隨著人們對藥品的安全意識的加強，藥界對萬古霉素的純度要求越來越高。在萬古霉素原料藥市場上，價格也是與純度呈直接的相關，純度高的萬古霉素擁有更加強競爭力。

萬古霉素的純度直接受到分離純化工藝的影響。萬古霉素的分離純化方法主要有色譜制備法、沉淀法、親和吸附法、反膠團萃取法、雙水相萃取法等，但親和吸附法、色譜制備法的處理規模小、生產成本較高；反膠團萃取法和雙水相萃取法的影響因素復雜，提取率不高；沉淀法處理規模大、生產成本較低，但是鑒于萬古霉素屬于酚苷化合物，在強堿條件下不穩定，容易造成萬古霉素變性。如公開號為CN1033997的中國發明專利公開了一種改進的萬古霉素的沉淀法，從pH至少約為7.8的水溶液中靜止沉淀萬古霉素，但是該方法操作較為復雜，要求萬古霉素粗品的濃度不得低于75mg/ml，并且由于在強堿條件下進行沉淀，萬古霉素變色較為嚴重。

為了提高生產效率，降低生產成本同時得到高純度的萬古霉素，也有將兩種方法組合使用的。如公開號為CN101440127A的中國發明專利將色譜純度不低于80%的萬古霉素粗品經過層析柱，然后使用沉淀法，將親和吸附法和沉淀法結合，得到純度高于96%的萬古霉素。CN101440127A使用的是Sephadex?C系列樹脂為填料，用4-6%（w/v)NH₄HCO₃水溶液洗脫的方法純化，過柱過程中NH₄HCO₃會分解起泡，從而影響分離效率。另外，CN101440127A沉淀法用的是加NaCl鹽析萬古霉素的方法，其鹽析耗費的時間長達24-48小時（見實施例17-22），分離時間長，生產效率低。

發明內容

為了克服上述現有技術中存在的缺陷，本發明提供一種高純度的萬古霉素的分離提純方法，耗時短，生產效率高，并且得到的萬古霉素外觀大大改善，純度高達99%，能夠用于口服或注射給藥。

本發明的技術方案為提供一種高純度萬古霉素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將萬古霉素脫色液在含有NH₄HCO₃流動相的層析介質中進行柱層析，所述層析介質為UniPMM50CAR，所述NH₄HCO₃流動相中NH₄HCO₃質量體積濃度為0.2-0.7%；在檢測波長280nm，吸光度升至40時，開始分段收集層析液，用鹽酸將層析液pH調至3.0-3.5，4℃條件下保存層析液，合并收集的層析液。

優選的上述的高純度萬古霉素的制備方法中，所述流動相以流量為2.5倍柱體積/小時進行洗脫。

優選的上述的高純度萬古霉素的制備方法具體為：

S1：將萬古霉素脫色液在含有NH₄HCO₃流動相的層析介質中進行柱層析，所述層析介質為UniPMM50CAR，所述NH₄HCO₃流動相中NH₄HCO₃質量體積濃度為0.2-0.7%；在檢測波長280nm，吸光度升至40時，開始分段收集層析液，用鹽酸將層析液pH調至3.0-3.5，4℃條件下保存；