[發明專利]一種利用磷霉素選育達托霉素高產菌株的方法

無效

• 申請號: 201310311308.3
• 申請日: 2013-07-23
• 公開（公告）號: CN104342379A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 沈依群;張曉來;陸茂林;錢國芬;許春燕;司竑飛;楊曉偉
• 申請（專利權）人: 江蘇省微生物研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用磷霉素選育達托霉素高產菌株的方法，其特征在于包括以下過程：將玫瑰孢鏈霉菌(Streptomyces?roseosporus)親株的斜面孢子用無菌水制成10⁵-10⁷個孢子/ml的單孢子懸液，將1-3ml的孢子懸液分裝于玻璃皿中，于15瓦紫外燈下處理0.5-1.5分鐘，然后將輻射處理的孢子懸液用無菌水稀釋到10^-3-10^-5后，涂布于培養平板中26-28℃培養7-8天，用無菌竹簽將長出的菌落挑出接種于含有200-1000μg/ml的磷霉素的篩選平板上，挑取對相應濃度磷霉素敏感的菌落，于斜面培養基培養6-7天后，接種于裝有30ml液體發酵培養基的250ml搖瓶，于28-30℃，轉速為200-220rpm的搖床中培養120-160h，通過HPLC，檢測達托霉素產量，從而獲得高產的達托霉素產生菌。

2.按權利要求1所述的方法，其特征在于，篩選培養基組成及質量含量為：酵母粉2-5g，麥芽浸出粉8-12g，葡萄糖3-5g，磷霉素0.2-1g，瓊脂18-22g，去離子水1L，PH自然。

3.按權利要求1及2所述的方法，其特征在于，篩選平板中磷霉素的含量為：200μg/ml或400μg/ml或600μg/ml或800μg/ml或1000μg/ml。

4.按權利要去1所述的方法，其特征在于，液體發酵培養基組成及質量含量為：可溶性淀粉6-10g，酵母粉4-6g，糊精10-20g，干酪素3-5g，胰蛋白胨4-10g，K₂SO₄3-5g，L-天冬酰胺1-3g，溶于1L自來水中，PH7.5。