[發明專利]除去抗A、抗B抗體以及多反應性免疫球蛋白IgG的免疫球蛋白G(IgG)濃縮物

有效

• 申請號: 201310308621.1
• 申請日: 2006-12-26
• 公開（公告）號: CN103394084A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 阿布德薩塔·什圖魯;弗雷德里克·戴諾;菲利普·保蘭托納奇
• 申請（專利權）人: 分餾和生物工藝法國實驗室公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P31/00;C07K16/00;C07K16/34
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 李春晅;叢芳

技術領域

本發明涉及除去抗A(AcaA)和抗B(AcaB)抗體的免疫球蛋白G(IgG)濃縮物，其具有明顯降低的多反應性，以及涉及獲得上述濃縮物的方法。?

背景技術

自從Cohn研制出乙醇沉淀法，富集免疫球蛋白(Ig)成分的人血漿用于各種感染或者先天性缺陷疾病的治療(Cohn等,1946,J.Am.Chem.Soc.68,459;Oncley等,1949,J.Am?Chem.Soc.71,541).?

對用于靜脈注射(IgIV)的高純化Ig復合結構的需求越來越多，例如從人血漿中獲得。免疫球蛋白的絡合物結構(由二硫鍵連接的四肽鏈)，以及來自于數千供血者的血漿混合物中存在著的各種抗體，成為目前不能夠促進免疫球蛋白生物技術發展的因素。雖然通過基因工程生產單克隆抗體，它們的極端特異性對治療應用相當于一個缺點，在治療應用中多種特異性顯得是必需的。?

另一方面，例如，在近些年來的歐洲和美國，例如源自身免疫的許多病理，目前用IgG濃縮物治療會導致它的一個缺陷。?

獲得免疫球蛋白尤其是IgG濃縮物的方法，除了用乙醇使蛋白選擇性沉淀，也可以包含其它各種方法，例如聚乙二醇沉淀法，受控蛋白水解酶法處理……用于除去免疫球蛋白聚合物中的聚集體，這些局集體可以激活與過敏反應危險相關的補充系統。同時，在體內存在于IgGIV中的二聚體和動脈壓下降相關(Bleeker?W.K.等,Blood,95,2000,p.1856-1861).?

Steinbuch等已描述了一種可選擇的方法是乙醇沉淀法(Rev.Et.?Clin.et?Biol.1969,XIV,1054)，其依賴于辛酸沉淀。這種酸沉淀了絕大多數的血漿蛋白，并把免疫球蛋白留在上層清液中。通過陰離子交換劑DEAE纖維素來提純這些免疫球蛋白，提純的條件是該陰離子交換劑不保留IgG。接著對非保留IgG的成分進行濃縮。?

同時使用色譜技術已經研發了各種方法增加產品的純度。特別提及是的專利申請EP0703922和WO99/64462，其為至少兩個相關聯的連續色譜分析步驟，一個使用陰離子交換，另一個使用陽離子交換。這些方法的特異性在于該陰離子交換劑的性能，在傳統的色譜分析條件下不會阻留免疫球蛋白G，但是它們反而在預提純步驟中固定共純化大多數其它蛋白。也可以引用由申請人提交的類似專利申請WO02/092632，其公開了在陰離子交換劑上，在堿性pH下使用單個色譜分析步驟制備Ig濃縮物，在色譜分離介質上將它們固定。?

然而，許多科學刊物指出通過上述分餾技術獲得的IgG的注射會導致接受治療的患者偶爾會出現溶血現象，有時還很嚴重。例如，可以引用以下文獻：Buchta?C等,Biologicals,33,2005,41-48,Wilson?J.R.等,Muscle?&Nerve,29(9),1997,1142-1145,Copelan?E.A.等,Transfusion,26,1986,410-412and?Misbah?S.A.等,Drug?Safety,9,1993,254-262.對患有溶血的病人血液影響的研究，尤其是使用直接抗人球蛋白試驗(直接抗人球蛋白試驗-DCT)進行的研究，顯示紅細胞表面被直接抑制抗原A、B或者D的免疫球蛋白覆蓋，因此導致溶血。這就是為什么在市場上可得到的IgG是通過選擇性血漿獲得的，以避免存在抗-D免疫球蛋白，或在抗體-A或抗體-B中滴定度高的其他抗體。?

Buchta等引用上述文獻，考慮通過不同途徑使源于O和B血型供體的抗A抗體、源于O和A血型供體的抗B抗體和血漿衍生物例如IgG顯著減少，這是為了使溶血的風險降到最低，當使用這些血漿衍生物治療患者的時候，該溶血風險與這些抗體的水平直接相關。特別要正視選擇供體，去除抗A和抗B抗體，生產源于特定血型(A和/或B血型)血漿的衍生物，以及排除那?些具有高滴定度抗A和抗B抗體的血漿的批次。考慮到成本或提取步驟的復雜性，一些方法被認為是不現實的。應當注意在上述乙醇分餾期間，部分除去了抗A和抗B抗體。?

由于對IgG的需求不斷地增加，也就需要逐漸增大的供者庫，統計學上將包括更多的O型血的供者。因此，血漿衍生物如IgG將包含大量抗A和抗B抗體，由于這些抗體的濃度太高，通過傳統分餾很難去除。?

這些增加的需求使得只從AB血型中選擇以確保低含量的抗A和抗B抗體成為不可能。?