[發明專利]四環素適配體與檢測四環素的適配體電化學生物傳感器

有效

• 申請號: 201310306411.9
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN103361353A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 劉大嶺;陳丹;謝春芳;姚冬生
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N27/327;G01N27/416
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，涉及一種四環素適配體以及檢測四環素的適配體電化學生物傳感器，以及該傳感器的制備方法與檢測方法。

背景技術

四環素（tetracyclines，TCs）是由放線菌產生的一類含有駢四苯結構的廣譜抗菌藥物，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌及螺旋體、立克次體、衣原體、支原體及原蟲等均有抑制作用，其抗菌機制主要為抑制菌體蛋白質合成。目前四環素類抗生素已經成為我國畜禽飼養業中生產量和臨床使用量最大的抗生素。四環素可直接作為一種飼料添加劑投放到飼料中，也可用作生長促進劑投喂給動物，在藥品市場中占有重要地位。但由于四環素的濫用給人和動物的健康帶來極大的危害同時對動物性食品的食用安全帶來不穩定因素，影響養殖業的健康發展和走向國際市場。四環素的危害集中體現在：急性中毒，過敏反應和變態反應，三致作用：致癌、致畸、致突變，影響胃腸道菌群，細菌耐藥性增加。

目前關于四環素類抗生素的檢測方法有微生物法、酶聯免疫法、薄層色譜法、毛細管電泳法、電化學法、質譜連用法和高效液相色譜法等，其中微生物法操作簡單、費用低，但特異性差，靈敏度低，耗時長；酶聯免疫法雖特異性較高，但存在高背景吸收、操作繁瑣（需大量的孵育及洗滌步驟）以及酶易受樣品影響等缺點，薄層色譜法的測量靈敏度難以達到要求，毛細血管法分析速度快、分離效率高、運行成本低，但技術不是很成熟，且不適用于小分子的檢測，質譜連用法和高效液相色譜法需要大型的儀器，價格昂貴。而電化學方法具有操作簡單、特異性好、靈敏度高、可在線和易于微型化等優點，目前已引起了人們的廣泛關注。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種可用于樣品中四環素含量快速檢測的生物傳感器。該生物傳感器靈敏度更高，穩定性和重現性更好，響應時間更快，并且可快速用于樣品中四環素檢測的生物傳感器及其組裝方法。

為了解決現有四環素檢測成本高、檢測方案復雜、檢測時間過長的缺點，本發明的第一個目的是提供一種四環素適配體。

本發明所述的四環素適配體為含有TTGAGCCCT序列、長度為13-20bp的單鏈DNA探針，且5’端修飾了氨基即5’-NH₂-(CH₂)₆-。

本發明的第二個目的是提供一種檢測四環素的適配體電化學生物傳感器。

本發明所述的檢測四環素的適配體電化學生物傳感器，含有本發明所述的四環素適配體。

本發明的第三個目的是提供一種適配體電化學生物傳感器的制備方法。

本發明所述的適配體電化學生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：

（1）裸金電極表面的拋光及活化處理：將裸金電極用氧化鋁粉末打磨，用超純水超聲清洗去除氧化鋁粉末，將清洗好的裸金電極浸入新鮮配制的熱的Piranha溶液于20-25℃下活化10分鐘，得到活化的裸金電極；

（2）活化電極的適配體修飾：合成如本發明所述的適配體，配制100μmol/L的適配體溶液，加入到NaCl溶液中配制成2μmol/L適配體組裝液；將步驟（1）所得的活化的裸金電極浸入適配體組裝液中，密封4℃下組裝24小時，得到所述的適配體電化學生物傳感器。

根據本發明所述的適配體電化學生物傳感器的制備方法的進一步特征，所述步驟（1）中采用的Piranha溶液中，濃硫酸與30%H₂O₂的體積比是7:3。

本發明的第四個目的是提供一種本發明所述的適配體電化學生物傳感器的用途，即將本發明所述的適配體電化學生物傳感器用于檢測四環素的用途。

本發明的第五個目的是提供一種檢測四環素的方法，該方法是基于本發明所述的適配體電化學生物傳感器的檢測方法。

本發明所述的基于如權利要求2所述的適配體電化學生物傳感器的檢測四環素的方法，包括以下步驟：

（1）對四環素標準溶液進行檢測，建立標準曲線：

將所述的適配體電化學生物傳感器作為工作電極，Ag/AgCl（飽和KCl）電極作為參比電極，鉑絲電極作為對電極；