[發(fā)明專(zhuān)利]萊克多巴胺適配體與檢測(cè)萊克多巴胺的適配體電化學(xué)生物傳感器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310306401.5
• 申請(qǐng)日: 2013-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103343126A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉大嶺;陳丹;周妮;謝春芳;姚冬生
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/115
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/115;C12Q1/68;G01N27/30;G01N27/26
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

1.一種萊克多巴胺適配體，其特征在于，所述適配體為含有AGTGCGGGC序列、長(zhǎng)度為13-20bp的單鏈DNA探針，且5’端修飾了氨基即5’-NH₂-(CH₂)₆-。

2.一種檢測(cè)萊克多巴胺的適配體電化學(xué)生物傳感器，其特征在于：所述的電化學(xué)生物傳感器中含有如權(quán)利要求1所述的適配體。

3.如權(quán)利要求2所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）裸金電極表面的拋光及活化處理：將裸金電極用氧化鋁粉末打磨，用超純水超聲清洗去除氧化鋁粉末，將清洗好的裸金電極浸入新鮮配制的熱的Piranha溶液于20-25℃下活化10分鐘，得到活化的裸金電極；

（2）活化電極的適配體修飾：合成如權(quán)利要求1所述的適配體，配制100μmol/L的適配體溶液，加入到NaCl溶液中配制成2μmol/L適配體組裝液；將步驟（1）所得的活化的裸金電極浸入適配體組裝液中，密封4℃下組裝24小時(shí)，得到所述的適配體電化學(xué)生物傳感器。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中采用的Piranha溶液中，濃硫酸與30%H₂O₂的體積比是7:3。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適配體電化學(xué)生物傳感器用于檢測(cè)萊克多巴胺的用途。

6.一種基于如權(quán)利要求2所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的檢測(cè)萊克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對(duì)萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：

將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器作為工作電極，Ag/AgCl（飽和KCl）電極作為參比電極，鉑絲電極作為對(duì)電極；

將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器用超純水沖洗，去除未結(jié)合的適配體，然后置于濃度為5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]電解液中，電解液含濃度0.1mol/L的KCl，差分脈沖伏安法（DPV）分析，掃描高電位為0.7V，低電位為0.3V，掃速為0.02V/s，振幅為0.05V，得到適配體傳感器的DPV圖譜及其峰電流值Ip₀；

將差分脈沖伏安分析后的適配體傳感器用超純水沖洗后浸入濃度0.05ng/mL的萊克多巴胺水溶液中，室溫孵育15min，反應(yīng)后用超純水沖洗去除非特異性吸附的萊克多巴胺，然后置于濃度為5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]，含濃度0.1mol/LKCl的電解液中進(jìn)行差分脈沖伏安分析，掃描高電位為0.7V，低電位為0.3V，掃速為0.02V/s，振幅為0.05V，得到濃度0.05ng/mL的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)液的DPV圖譜及其峰電流值Ip₁；

同理，將上述修飾電極依次放入濃度0.1ng/mL、0.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、1.0×10²ng/mL的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)液中，分別于室溫下孵育反應(yīng)15分鐘，分別進(jìn)行差分脈沖伏安分析，記錄其對(duì)應(yīng)的DPV圖譜及其峰電流值Ip_n（n=2,3…8），并計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)液相對(duì)初始的適配體傳感器的峰電流變化值△Ip即各標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)的峰電流值Ip_n（n=1,2,3…8）減去適配體傳感器對(duì)應(yīng)的峰電流值Ip₀；

以濃度為0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、1.0×10²ng/mL的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)液濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以這7種標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)的峰電流變化值△Ip為縱坐標(biāo)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

（2）對(duì)含萊克多巴胺的樣品溶液進(jìn)行定量檢測(cè)：

根據(jù)GB/T21317-2007所述方法對(duì)樣品中的萊克多巴胺進(jìn)行提取純化；將得到的萊克多巴胺干粉用超純水溶解后過(guò)0.45μM濾膜，然后進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)；

將差分脈沖伏安分析后的適配體傳感器用超純水沖洗后浸入從實(shí)際樣品溶液中提取純化得到的萊克多巴胺水溶液中，室溫孵育15分鐘，反應(yīng)后用超純水沖洗，然后置于濃度為5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]，含濃度0.1mol/L?KCl的電解液中進(jìn)行差分脈沖伏安分析，掃描高電位為0.7V，低電位為0.3V，掃速為0.02V/s，振幅為0.05V，得到實(shí)際樣品中萊克多巴胺溶液檢測(cè)的DPV圖譜及其峰電流值Ip_s；通過(guò)步驟（3）建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算出Ip_s-Ip₀對(duì)應(yīng)的萊克多巴胺濃度即為實(shí)際樣品中萊克多巴胺的濃度。