[發明專利]一種適用于延長成年公兔精液常溫保存時間的方法及稀釋液

無效

• 申請號: 201310306297.X
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN103314951A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 李擁軍;張佳慧;蔡繆熒;張光景;楊波
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于生物學領域，具體涉及一種適用于延長成年公兔精液常溫保存時間的方法。

背景技術

人工授精技術是家畜繁殖改良工作中最經濟科學的方法。該技術是對精液進行品質鑒定及稀釋后保存一段時間，或直接輸入發情母畜生殖道內，以代替自然交配的配種方法。近年來，隨著兔規模化養殖的不斷發展，人工授精技術在集約化兔場中得到普及推廣與應用，并在降低飼養成本、提高繁殖效率中發揮了顯著的作用。與兔人工授精技術相配套的兔精液常溫保存技術也越來越受到人們的重視。

精液常溫保存是將精液稀釋后保存在一定變動幅度的室溫下，利用一定范圍的弱酸性環境抑制精子活動，減少其能量消耗，使精子保持在可逆性的靜止狀態而不喪失受精能力，達到保存精子的目的。常溫保存無需特殊溫控和制冷設備，操作程序簡單，具有一定應用價值，特別適宜豬、兔等動物精液的保存。動物精液經稀釋后能擴大精液量，利于精子的保存和運輸，延長精子在體外的存活時間，增強其受精能力，充分提高優良種公兔的配種效率。因此，精液稀釋液的配制是人工授精的一個重要環節。

精液保存時，如果精子暴露在有氧環境中，會發生氧化反應而產生活性氧（也稱自由基），在活性氧濃度過高時影響精子質膜完整性及精子形態功能，還能破壞精子中的DNA結構，降低精子的活力和受精能力。因此，在稀釋液中添加抗氧化物質來保護精子免受外界因素的損傷是一種有效可行的方法。目前，常用的抗氧化物質有超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、維生素類（如維生素C、維生素E）以及氨基酸類等。

目前，在關于維生素作為精液稀釋液添加成分的相關研究報道中，有研究者報道了在精液常溫保存時，精液稀釋液中加入維生素B₁₂、維生素E，對羊及豬精液保存效果的影響。亦有研究者針對維生素C的作為精液稀釋液添加成分，結合與其他藥物聯用，研究了相關稀釋液對于牛、羊、豬、馬等動物的精液冷凍保存和低溫保存效果的影響。由于不同維生素在精液保存過程中的作用機理不盡相同，同時，各種動物精子的生理特性亦有差異，所以，從目前的研究情況來看，不同維生素在不同動物精液保存中應用的效果并不相同。

維生素C又名抗壞血酸，在機體內許多氧化還原反應中起重要作用。它具有強還原性，常被用作抗氧化劑。維生素C作為一種有效的自由基清除劑，添加于精液中可以有效維持精細胞基因結構的完整和防止精子磷脂發生過氧化，從而起到直接保護精子的作用和效能，而且，還可以通過保護其他抗氧化劑（如維生素E、不飽和脂肪酸以及抗氧化酶）間接保護精子。如維生素C可使氧化型的谷胱甘肽轉變為還原型的谷胱甘肽，從而起到保護酶的活性基團-SH的作用。已有的一些研究結果表明，冷凍及低溫保存條件下添加維生素C對畜禽精液品質有一定的影響。但有關維生素C對畜禽精液常溫保存效果影響的研究報道目前國內外還尚屬少見。特別是針對兔精液常溫保存中單獨添加抗氧化劑維生素C的研究尚未見有報道。

本研究目的在于利用維生素C作為精液稀釋液的添加成分，建立一種適用于延長成年公兔精液常溫保存時間的方法，以利于兔精液常溫保存技術的普及推廣。

發明內容

為了解決公兔精液常溫保存的問題，本發明提供一種適用于延長成年公兔精液常溫保存時間的稀釋液及方法。

本發明所述的一種適用于延長成年公兔精液常溫保存時間的方法，是在葡－檸－卵基礎稀釋液中添加0.75mg/mL維生素C，用于精液常溫保存。

一種用于成年公兔精液常溫保存稀釋液，是葡－檸－卵基礎稀釋液中添加0.75mg/mL維生素C，所述葡－檸－卵基礎稀釋液配方為：葡萄糖3g，檸檬酸鈉1.4g，雙蒸水95mL，卵黃5mL，青霉素、鏈霉素各10萬IU/100mL。

本發明利用成年新西蘭白兔公兔，對其采精后，在精液稀釋液（葡萄糖－檸檬酸鈉－卵黃基礎稀釋液）中添加不同含量的抗氧化物維生素C（0mg/mL、0.25mg/mL、0.50mg/mL、0.75mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL和2.00mg/mL），研究其對成年新西蘭白兔精液常溫保存效果的影響，選出優化的維生素C添加含量，建立了一種方便快捷、經濟實用的延長成年公兔精液常溫保存時間的方法。

具體實施方式

1、試驗動物選用15只同批出生、體質健康、體重接近、經精液品質檢查合格的成年新西蘭公兔作為試驗兔。

2、試驗分組葡－檸－卵精液基礎稀釋液：葡萄糖3g，檸檬酸鈉1.4g，雙蒸水95mL，卵黃5mL，青霉素、鏈霉素各10萬IU/100mL。試驗共分為七組：其中I組為對照組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組為試驗組。