[發明專利]金線蓮種苗的無激素組織培養及快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310305945.X
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN103416305A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 陳菁瑛
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院農業生物資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州科揚專利事務所 35001
• 代理人: 徐開翟

1.一種金線蓮種苗的無激素組織培養及快速繁殖方法，其特征在于：該方法包括以下四個組織培養階段：

（1）種子無菌萌發形成原球莖：選擇金線蓮近成熟的蒴果，進行蒴果表面消毒滅菌處理后，將蒴果切開，取出種子均勻播種在無激素種子萌發培養基上，播種后的培養瓶置于溫度20-28℃、無光照條件下培養誘導種子萌發，培養時間30-40天，使種子膨大、萌發形成白色或乳黃色的原球莖；所述無激素種子萌發培養基為：MS或N6基本培養基+土豆泥100-150g/L+白糖20-30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.4-5.8；

（2）原球莖的增殖與小苗分化培養：將第（1）階段獲得的原球莖轉入無激素增殖與分化培養基中，培養溫度20-28℃，光照強度1500-2500lx，光照時間8-12小時/天，培養時間60-90天，使原球莖增殖并分化形成帶葉和莖的芽或者具有葉、莖及胚根的無菌苗；所述的無激素增殖與分化培養基為：MS或N6基本培養基+土豆泥100-200g/L+番茄汁50-100g/L+蛋白胨1-3g/L+白糖20-30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.4-5.8；

（3）無菌苗壯苗培養：將第（2）階段獲得的已分化的芽或無菌苗轉移進行1-2次的壯苗培養，每次壯苗培養由以下兩個依次進行的培養周期組成：

第一個培養周期：將無菌苗轉入無激素壯苗培養基A中，培養時間30-50天，培養溫度20-28℃，光照強度1500-2500lx，光照時間8-12小時/天；所述無激素壯苗培養基A為：MS或N6基本培養基+土豆泥100-150g/L+蛋白胨1-3g/L+活性炭0.5-2.0g/L+白糖20-30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.4-5.8；

第二個培養周期：將無菌苗轉入無激素壯苗培養基B中，培養時間30-50天，培養溫度20-28℃，光照強度1500-2500lx，光照時間8-12小時/天；所述無激素壯苗培養基B為：MS或N6基本培養基+土豆泥50-100g/L+香蕉泥100-200g/L+活性炭0.5-2.0g/L+白糖20-30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.4-5.8；

第1次壯苗培養結束后，選擇具有2片以上葉片且株高2cm以上的無菌壯苗進入第（4）階段的生根培養，其余的棄用或者接著進行第2次壯苗培養；第2次壯苗培養結束后，選擇具有2片以上葉片且株高2cm以上的無菌壯苗進入第（4）階段的生根培養；

（4）生根培養：將第（3）階段獲得的無菌壯苗轉入無激素生根培養基中，培養溫度20-28℃，光照強度1500-2500lx，光照時間10-14小時/天，培養時間40-60天；所述無激素生根培養基為：MS或N6基本培養基+香蕉泥100-200g/L+土豆泥0-50g/L+活性炭1-2g/L+白糖20-30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.4-5.8。

2.根據權利要求1所述的金線蓮種苗的無激素組織培養及快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）所選擇的金線蓮近成熟的蒴果指金線蓮人工授粉后50-80天、飽滿、硬實、無病蟲危害且外表為紅色或淺棕色的蒴果，或者野生金線蓮自然授粉后、飽滿、硬實、無病蟲危害且外表為紅色或淺棕色的蒴果。

3.根據權利要求1或2所述的金線蓮種苗的無激素組織培養及快速繁殖方法，其特征在于：所述的蒴果表面消毒滅菌處理是將所選取的蒴果置于無菌超凈工作臺上，用濃度為60%-95%的酒精浸泡30-60秒后，取出轉入濃度為8-15%的次氯酸鈉溶液中消毒8-10分鐘，接著取出轉入無菌容器中用無菌水浸洗3-5次，最后取出用無菌紙吸干蒴果表面水分。

4.根據權利要求3所述的金線蓮種苗的無激素組織培養及快速繁殖方法，其特征在于：蒴果表面消毒滅菌處理過程中，使用的酒精濃度為75%。