[發明專利]針對微小RNA-21種子序列的反義寡聚核苷酸及應用

有效

• 申請號: 201310304132.9
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103320444A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 費嘉
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;陳燕嫻

技術領域

本發明屬于藥物制備領域，具體涉及一種針對微小RNA-21種子序列的反義寡聚核苷酸及應用。

背景技術

microRNA（miRNA）是一類長度約22個核苷酸的內源性非編碼單鏈小分子RNA，參與細胞的分化、增殖和調亡、個體發育、機體代謝等生理過程。miRNA5'端的“種子序列”（miRNA5'端7-8個核苷酸序列）與其靶基因mRNA的3'非翻譯區（3'untranslated?region，3'UTR）進行堿基完全互補配對，促進靶基因mRNA降解或抑制mRNA翻譯，從而對靶基因的表達水平進行轉錄后調控。

至2012年8月，已有21264條目miRNA序列記載于人類基因組中（Sanger?miRBasel9.0數據庫）。有研究發現屬于ncRNA范疇的miRNA不僅在胚胎發育和細胞分化上發揮關鍵作用，也與腫瘤的發生、發展有著密切的關系。約有50％的miRNA集中于腫瘤基因組的脆性位點區或者與癌癥相關的區域，幾乎所有的腫瘤都有異常表達的miRNA，通過miRNA芯片檢測發現，在多發性骨髓瘤患者的骨髓瘤細胞中，miRNA-29b表達水平顯著降低，miR-106b-25群（cluster）、miR-181a/b和miR-19a/b表達則相對升高。通過本課題組的實驗發現在慢性粒細胞株K562中，miR-181a表達下調。一系列研究表明，miRNA在多種腫瘤中既可作為抑癌基因下調癌基因的表達，也可作為癌基因下調抑癌基因的表達。并且在不同的腫瘤組織或細胞內，miRNA具有特定的表達模式，明顯的組織特異性。miRNA對靶基因表達的調控為揭示腫瘤的發病機制、指導治療及判斷預后方面提供了新的機遇。

miR-21是miRNA家族中的一個亞型，位于17q23.2染色體FRA17B脆性區域上，是具有自主轉錄單位的miRNA，并且有高度保守性。Chan等（Chan?J?A，Krichevsky?A?M，Kosik?K?S，et?a1．Cancer?Res，2005，65(14)：6029）首次發現miR-21在人惡性膠質瘤中高表達，并通過抑制細胞凋亡促進腫瘤的發生。對腫瘤樣本或細胞株中的miRNAs的表達水平進行轉錄圖譜研究，發現miR-21負性調節STAT3、PTEN、PDCD4、AP1、TGFβ等多種靶基因，在多種實體瘤（肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌、頭頸部腫瘤、食管癌等）以及非實體瘤（慢性淋巴細胞性白血病、B細胞性淋巴瘤等）中高表達，起著致癌基因的作用。miR-21與腫瘤的轉移侵入也有密切關系。通過一系列的實驗方法調節miR-21在腫瘤中的表達，能夠減少腫瘤的增殖，抑制腫瘤的轉移及侵入。所以，敲除或抑制miR-21的表達，使其失去癌基因的功能，就可以在一定程度上治療相關癌癥。研究表明，miR-21可以作為癌癥診斷以及治療的一種新的生物標志物（Zheng?J，Xue?H，Wang?et?a1．J?Cell?Biochem，2011，112：872-880．）。因此，miRNA-21可能成為多種癌癥治療新的靶點。

慢性粒細胞白血病以及多發性骨髓瘤都是惡性增殖性疾病，傳統的化學藥物都存在一定的毒副作用，因此急需尋找新的藥物。已有研究結果表明microRNA-21在包括慢性髓系白血病的多種癌癥中高表達，并且對腫瘤細胞的增殖和遷移起到明顯的促進作用，提示拮抗microRNA-21的表達可能成為慢性髓系白血病等腫瘤治療的新靶點，針對microRNA-21靶點的藥物開發成為一個亟待解決的應用。

目前研究miR-21的表達調控的方法有RNA干擾技術、反義核酸技術和miRNA海綿技術等。由于成熟miRNA只有21nt，反義核酸技術表現出明顯的優勢，基于miRNA的作用機制，使用seed-targeting?tiny?LNA（Susanna?Obad,Camila?O?dos?Santos,Andreas?Petri?etal.Nature?genetics,2011,43(4):371-378.）作用于microRNA取得一定成效。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種針對微小RNA-21種子序列的反義寡聚核苷酸。

本發明的再一目的在于提供上述針對微小RNA-21種子序列的反義寡聚核苷酸的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種針對微小RNA-21種子序列的反義寡聚核苷酸（t-antimiR-21），其核苷酸序列如下：ATAAGCTA。

所述的反義寡核苷酸經過全硫代修飾。