[發(fā)明專(zhuān)利]轉(zhuǎn)化寇氏隱甲藻的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310302810.8
• 申請(qǐng)日: 2013-07-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104293824B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴小軍;許駿;蔡南海;姜翠紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 豐益(上海)生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/79
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/79;C12R1/89
• 代理公司: 72001 中國(guó)專(zhuān)利代理(香港)有限公司
• 代理人: 李波;萬(wàn)雪松

1.轉(zhuǎn)化寇氏隱甲藻(Crypthecodinium cohnii)的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

在滲透壓調(diào)節(jié)劑的存在下懸浮寇氏隱甲藻及根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)；

將完整的寇氏隱甲藻細(xì)胞與重組根癌農(nóng)桿菌共培養(yǎng)；和

獲得根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的寇氏隱甲藻，

其中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑導(dǎo)致的滲透壓相當(dāng)于濃度是100mM-700mM的氯化鈉導(dǎo)致的滲透壓，并且所述滲透壓調(diào)節(jié)劑選自鈉鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈣鹽或糖、醇類(lèi)有機(jī)物。

2.一種制備轉(zhuǎn)基因寇氏隱甲藻(Crypthecodinium)的方法，其特征在于，所述方法包括在滲透壓調(diào)節(jié)劑的存在下，使用含有目標(biāo)基因的重組根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化完整的寇氏隱甲藻，其中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑導(dǎo)致的滲透壓相當(dāng)于濃度是100mM-700mM的氯化鈉導(dǎo)致的滲透壓，并且所述滲透壓調(diào)節(jié)劑選自鈉鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈣鹽或糖、醇類(lèi)有機(jī)物。

3.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、硫酸鈉、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、葡萄糖和山梨醇。

4.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、硫酸鈉、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、葡萄糖和山梨醇。

5.權(quán)利要求3的方法，其特征在于所述滲透壓調(diào)節(jié)劑導(dǎo)致的滲透壓相當(dāng)于濃度是200mM-400mM的氯化鈉導(dǎo)致的滲透壓。

6.權(quán)利要求4的方法，其特征在于所述滲透壓調(diào)節(jié)劑導(dǎo)致的滲透壓相當(dāng)于濃度是200mM-400mM的氯化鈉導(dǎo)致的滲透壓。

7.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻和/或所述根癌農(nóng)桿菌經(jīng)預(yù)培養(yǎng)處理。

8.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻和/或所述根癌農(nóng)桿菌經(jīng)預(yù)培養(yǎng)處理。

9.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻和所述根癌農(nóng)桿菌預(yù)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。

10.權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻和所述根癌農(nóng)桿菌預(yù)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。

11.權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻為預(yù)培養(yǎng)到對(duì)數(shù)初期的寇氏隱甲藻。

12.權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻為預(yù)培養(yǎng)到對(duì)數(shù)初期的寇氏隱甲藻。

13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在寇氏隱甲藻細(xì)胞與根癌農(nóng)桿菌共培養(yǎng)時(shí)添加乙酰丁香酮。

14.權(quán)利要求1-12的任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述寇氏隱甲藻選自ATCC30772、ATCC 40750、TEX L 1649、ATCC 30556、ATCC 50051、UTEX L 1649、RJH、CCMP 316、ATCC 50297、ATCC30556；所述根癌農(nóng)桿菌選自：根癌農(nóng)桿菌EHA105、EHA101、LBA4404、AGL-0、AGL-1、NT1、C58-Z707和GV3101::pMP90。

15.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法還包括獲得根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的寇氏隱甲藻的步驟。

16.權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法還包括獲得根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的寇氏隱甲藻的步驟。

17.權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法還包括獲得根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的寇氏隱甲藻的步驟。