[發明專利]表達新型defensin抗菌肽的DNA

無效

• 申請號: 201310301542.8
• 申請日: 2013-07-18
• 公開（公告）號: CN103642811A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 彭扣;洪一江;王軍花;盛軍慶
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及表達抗菌肽的DNA。

背景技術

目前，由于過度追求經濟效益，高密度、集約化的珍珠養殖模式快速發展，使得養殖病害日趨嚴重，各種病害頻繁爆發，已成為淡水珍珠養殖業健康可持續發展的主要瓶頸。各類農藥、抗生素盲目無序和頻繁使用，不僅對病害的預防與治療沒有起到明顯作用，而且，由于這些藥物的大量使用嚴重破壞了自然生態環境，藥品的殘留已經直接威脅到人類的健康，因此，發現和尋找通用性強、防治效果好、廣譜無污染的新型病害預防和治療藥物，成為人們亟待解決的重要課題之一?？咕模―efensin）又稱抗微生物肽，是參與動物先天性免疫防御功能的重要組分，具有廣譜殺菌、抑病毒、抑真菌、抑寄生蟲等作用的一類膜活性多肽，不易引進微生物的耐藥性，成為抗生素藥物的理想替代品?？咕淖饔脵C理非常獨特，研究表明，抗菌肽作用于細菌細胞膜，使細胞膜發生穿孔，破壞膜的完整性，使細菌因不能保證正常滲透壓而死亡（Park,?Y.,?Biochim?Biophys?Acta.?2003,?1645(2):?172-182）。

Defensin是貝類抗菌肽中的一大類群，其典型特征是分子內具有6個或8個保守的半胱氨酸殘基組成的二硫鍵，二級結構包括一個α螺旋和兩個反向平行的β折疊，分子量約3-5?kDa。在紫貽貝(M.?galloprovincialis)、太平洋牡蠣（Crassostrea?gigas）、海灣扇貝(Argopecten?irradians)和菲律賓蛤仔(Ruditapes?philippinarum)等海水貝類中都有研究過Defensins。研究表明，病原菌刺激貽貝(Mytilus.?galloprovincialis)后可增強defensin在血淋巴中的轉錄表達。從牡蠣（Crassostrea?gigas）的鰓組織中分離純化到defensin蛋白對革蘭氏陽性和陰性菌均具有較強抑菌活性（Seo,?et?al.,?Biochem?Biophys?Res?Commun,?2005,?338?(4):?1998-2004）。此外，已證明無論是化學合成或體外重組表達的一些海水貝類defensins均能表現出較強的殺菌功效（Adhya,?et?al.,?Comp?Biochem?Physiol?B.?2012,?161(1):25-31;?Gueguen,?et?al.,?J?Biol?Chem,?2006,?281(1):?313-23;?Xu?and?Faisal,?Molecular?Immunology,?2010,?47:?2138-2147;?Zhao,?et?al.,?Molecular?Immunology,?2007,?44?(4):?360-368;?Zhao,?et?al.,?PLoS?One,?2010,?5(10):?e13480）。

發明內容

本發明涉及一種表達新型Defensin抗菌肽的DNA，所表達出的新型Defensin抗菌肽具有良好的抗菌性能。

具體技術方案如下：

表達新型defensin抗菌肽的DNA，序列如SEQ：1所示。

所述DNA編碼的新型defensin抗菌肽：(a)其氨基酸序列如SEQ:2所示；或(b)?將（a）中的序列經過一個或多個氨基酸的取代，缺失或添加具有抗菌肽功能的由(a)衍生的新型defensin抗菌肽。

本發明還涉及：

表達新型defensin抗菌肽的DNA的載體。

所述表達新型defensin抗菌肽的DNA的載體為pGEX-4T-1-defensin。

由于抗菌肽天然資源有限，鑒于化學合成肽類成本高，而基因工程方法大量生產抗菌肽的途徑較為現實，并顯示出良好應用前景。本發明主要是在一種淡水珍珠貝類鑒定發現了一種抗菌肽Defensin基因序列，并采用一種基因工程手段獲得了其產物，抑菌實驗分析證明其能夠顯示出較強抑菌活性。因此，我們有望通過較廉價大規模的基因工程重組方法獲得大量的此類抗菌肽，將其應用在淡水珍珠養殖過程中既能有效地防治的各種疾病的發生，又可避免了濫用抗生素帶來的日益嚴重的微生物對抗生素的耐藥性問題，同時極大地降低了珍珠養殖過程中用于其病害防治的藥物經濟成本。