[發(fā)明專利]miR-375的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310300968.1
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103495181A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 寧光;何娟;王衛(wèi)慶;李小英;曹亞南
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P35/00;C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為用miRNA制備和篩選治療腎上腺腫瘤的藥物及診斷試劑。?

背景技術(shù)

近年來，隨著表觀遺傳學(xué)的興起，越來越多的研究開始關(guān)注非編碼核糖核酸（noncoding?RNA,ncRNA），其中的microRNA(miRNA)更成為發(fā)育、代謝、腫瘤等各個領(lǐng)域的新興研究熱點(diǎn)。microRNAs(miRNAs)是一類長約19-25個核苷酸大小的在進(jìn)化上非常保守的內(nèi)源性非編碼RNA，通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控對靶基因的表達(dá)水平產(chǎn)生影響；microRNAs在動植物和微生物中廣泛存在，由DNA經(jīng)RNA聚合酶II或III轉(zhuǎn)錄生成前體miRNA（pri-miRNA），之后pri-miRNA被Drosha酶切割形成長度大約70-100堿基的、具發(fā)夾結(jié)構(gòu)的pre-miRNA。這些發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA被核輸出蛋白exportin5轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)，再被胞漿中的Dicer酶切割形成成熟的miRNAs產(chǎn)物，同Ago2、TRBP等蛋白一起形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-induced?silencing?complex,RISC）。它們通過同靶基因mRNA的3’端非翻譯區(qū)（3’untranslated?region,3’UTR）的堿基完全或不完全配對，引起靶基因mRNA的降解和/或抑制該mRNA的翻譯，從而直接抑制蛋白質(zhì)的表達(dá)。近幾年來通過高通量測序等研究方法，已發(fā)現(xiàn)了上千種可編碼miRNA的基因，而超過30%的編碼蛋白質(zhì)基因受到這些miRNA的調(diào)控。?

自2002年Calin等人首次報道了在慢性淋巴細(xì)胞白血病中存在miR-15及miR-16的表達(dá)缺失及下調(diào)，miRNA在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及對腫瘤治療療效、預(yù)后判斷的影響逐漸為人們所認(rèn)識。現(xiàn)已有大量文獻(xiàn)報道了在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、肝癌等多種腫瘤性疾病中miRNA表達(dá)的異常及其調(diào)控機(jī)制，其或扮演了原癌基因或抑癌基因的角色。而miRNA在內(nèi)分泌相關(guān)代謝和腫瘤發(fā)生過程中的功能也已成為了研究熱點(diǎn)，如在胰腺癌，甲狀腺、垂體、卵巢腫?瘤中均可見miRNAs表達(dá)異常的相關(guān)報道。在腎上腺疾病中，對于基因表達(dá)差異及其與疾病和預(yù)后的相關(guān)性也有一些研究報道近期有研究報道了嗜鉻細(xì)胞瘤、庫欣綜合征、腎上腺皮質(zhì)癌等腎上腺腫瘤組織中miRNA的表達(dá)差異，而對于原醛癥，尚未見任何報道研究非編碼RNA的表達(dá)和功能，其中對于腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞增生的機(jī)制研究更加缺少。相較其他腫瘤的研究情況，這在很大程度上制約了人們對原醛癥的認(rèn)識，限制了診斷和治療技術(shù)手段的發(fā)展。越來越多證據(jù)顯示，miRNA參與了腫瘤生物學(xué)行為的多個環(huán)節(jié)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在將miR-375應(yīng)用于制備或篩選治療腎上腺腫瘤的藥物。?

本發(fā)明還將miR-375應(yīng)用于制備或篩選治療腎上腺皮質(zhì)癌的藥物。?

本發(fā)明還將miR-375應(yīng)用于制備或篩選調(diào)控或腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的藥物。?

通過體外實(shí)驗研究miRNA-375（miR-375）對腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的影響。在人H295R細(xì)胞系上以mimics瞬時轉(zhuǎn)染，使miR-375過表達(dá)，利用CCK-8，EDU染色觀察miRNA過表達(dá)導(dǎo)致的細(xì)胞增殖變化。?

結(jié)果顯示，miR-375過表達(dá)可抑制腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系H295R增殖。?

因此，miR-375對于腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞的增殖有調(diào)控作用，可用于制備篩選腎上腺皮質(zhì)癌或腎上腺腫瘤的藥物。?

本發(fā)明確定了miR-375與腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的關(guān)系，可將miR-375作為篩選的指標(biāo)，通過檢測mi-375的表達(dá)水平，來篩選制備治療腎上腺腫瘤尤其是治療腎上腺皮質(zhì)癌的藥物、或者是調(diào)控腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的藥物。?

附圖說明

圖1的A-E為實(shí)施例3中，原發(fā)性醛固酮增多癥中腺瘤、結(jié)節(jié)樣增生組織及正常對照組織中miRNA-375、miRNA-7、miRNA-29a、miRNA-29b和miRNA-29c的表達(dá)差異。?

圖2為實(shí)施例5中，在H295R瞬時轉(zhuǎn)染mimic時miR-375表達(dá)情況?

圖3為實(shí)施例5中，在H295R細(xì)胞系中過量表達(dá)miR-375時抑制細(xì)胞增殖的結(jié)果，A為CCK8檢測結(jié)果，B為EDU染色情況。?

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1?

確診為原發(fā)性醛固酮增多癥并行手術(shù)治療的患者128例?

I.篩查對象選擇標(biāo)準(zhǔn)：?