[發明專利]一種小分子抗體親和肽及其應用

在審

• 申請號: 201310300695.0
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN104163850A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 徐霞;韋宇平;徐建棟
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C07K5/103
• 分類號: C07K5/103;C07K5/113;C07K1/22;A61M1/34;A61M1/18
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 楊小蓉;楊青

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地，本發明涉及一種抗體高選擇性小分子抗體親和肽及其應用。

背景技術

免疫球蛋白IgG，即抗體是一種特殊的蛋白質分子，被作為體外診斷的試劑、治療疾病的藥物、免疫親和層析的配基等，在生命科學研究、生物技術及醫學領域中有著廣泛的應用。

目前，IgG的分離純化多采用抗體的天然親和配體Protein?A/G，由于Protein?A/G存在與抗體Fc片段專一性識別的能力，使用Protein?A/G親和色譜純化抗體，獲得的產品的純度較高。但是由于Protein?A/G也屬于具有活性的生物物質，因此Protein?A/G分離也存在一些問題：

1）價格昂貴：因為蛋白A配基需要通過基因工程的方法生產純化，因此生產成本高，其價格達到$10000/升親和介質；

2）缺乏有效的清洗方法，由于蛋白A在堿性環境下不穩定，因此不能使用一般的氫氧化鈉原位清洗法；

3）由于配基也屬于蛋白質，易被存在原料液中的蛋白酶水解，從而降低分離效果；

4）與一般的化學配基相比，蛋白A色譜的使用生命周期較短；

5）配基易脫落，脫落的蛋白A會引起人的免疫反應且在臨床上已經證實對人體有毒害；

6）洗脫pH較低（pH2-3），易引起一些抗體失活或者出現聚集，常常需要邊收集產品，邊中和，增加操作的復雜度。

對于抗體的分離純化，也有很多研究者嘗試使用小分子化合物作為配體，也取得的了一定的效果，但是目前的小分子化合物配體也存在一些問題：

1）生理毒性：目前的小分子化合物配體多含有雜環，具有一定毒性。例如，4-巰基-乙基吡啶（MEP），其對小鼠50%致死量為178mg/kg。

2）親和性差：目前的小分子化合物配體親和力通常較Protein?A/G低。

3）選擇性差：目前的小分子化合物配體在結合IgG的同時也會與主要分離雜質HAS（人血清白蛋白）結合。

所以，目前IgG的分離純化缺乏一種高效安全經濟的親和配體。

發明內容

本發明的目的在于針對上述問題，提供一種小分子抗體親和肽作為親和配體，實現高效安全經濟的IgG分離純化。

本發明的另一目的是提供上述小分子抗體親和肽的應用。

本發明的小分子抗體親和肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1-54中的任一項所示。

進一步地，根據本發明的小分子抗體親和肽，其結構特征，自N端至C端如下：

NH₂-R¹-R²-R³-R⁴-COOH，

其中，R¹為蘇氨酸（Thr）或谷氨酸（Glu）或門冬氨酸（Asp），R²為蘇氨酸（Thr）或谷氨酸（Glu）或門冬氨酸（Asp），R³為谷氨酸（Glu）或門冬氨酸（Asp）或脯氨酸（Pro），R⁴為半胱氨酸（Cys）或甘氨酸（Gly）。也可以理解為R¹和R²為酸性氨基酸及其衍生物，R³為酸性氨基酸或脯氨酸，R⁴為半胱氨酸（Cys）或甘氨酸（Gly）。

根據本發明的小分子抗體親和肽，所述小分子抗體親和肽與人免疫球蛋白IgG的Fc片段結合，并且其不與人血清白蛋白HSA結合。

進一步的，本發明通過將所述的小分子肽偶聯于載體以分離純化免疫球蛋白IgG。

本發明提供了一種小分子抗體親和肽，用于分離純化免疫球蛋白IgG，通過將所述的小分子肽偶聯于不同的載體可以實現不同條件下免疫球蛋白IgG的分離或純化，例如將該小分子肽偶聯于瓊脂糖凝膠，可以制備親和層析柱純化免疫球蛋白IgG；而將該小分子肽偶聯于透析器的中空纖維膜，則可應用于自身免疫性疾病的血液凈化治療，選擇性的清除致病IgG。

本發明與現有技術相比，具有以下優點和有益效果：