[發明專利]RET原癌基因634多態性位點在藥物制備中的應用

無效

• 申請號: 201310300645.2
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103409513A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 寧光;蔡潔;王衛慶;曹亞南;沈力韻
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術領域

本發明屬于醫藥生物領域，涉及RET原癌基因634多態性位點在制備篩選和診斷多發性內分泌腫瘤2A型藥物中的應用。?

背景技術

多發性內分泌腫瘤2型(MEN2)，又稱Sipple綜合征，由美國臨床醫生Sipple于1961年首先描述，為常染色體顯性遺傳性疾病，外顯率高，發病率約1/30000，根據不同的臨床表現，臨床將MEN2分為3種亞型：MEN2A、MEN2B及家族性甲狀腺髓樣癌（FMTC，Familiar?Medullary?Thyroid?Carcinoma）。其中最為多見的是MEN2A，約占MEN2的75％，以甲狀腺髓樣癌（MTC）為主要臨床表現，約90%的MEN2A攜帶者出現甲狀腺髓樣癌，約50％伴有嗜鉻細胞瘤(PCC，Pheochromocytoma)，20％～30％出現甲狀旁腺增生或腺瘤；MEN2B是MEN2的三種類型中惡性度最高且最少見的類型，MEN2B不發生PHPT，但是有特殊的發育缺陷：如肌肉骨骼畸形（馬凡體型，高弓足，漏斗胸，近端肌無力）、口唇部粘膜神經瘤、胃腸道表現如嘔吐、脫水，喂養困難，腸梗阻等。?

RET被認為是MEN2的致病基因。該基因于1985年確定，隨后通過家系研究和基因連鎖分析定位于第10號染色體上，在1993年和1994年，在MEN2A、FMTC和MEN2B的患者中分別證明RET基因的胚系突變是導致其發病的原因。RET基因編碼酪氨酸激酶受體，生理情況下，RET受體蛋白需要在配體、共受體的共同作用下激活。RET共受體(GFRα)是一組通過糖磷脂酰肌醇(GPI)連接定位于細胞膜表面的蛋白家族，包括GFRα21、GFRα22、GFRα23和GFR?α24。GDNF等配體先與共受體結合形成GFL/GFRα復合物，然后受體二聚化使兩個RET分子相互靠近，使胞漿內的酪氨酸殘基磷酸化，從而最終觸發細胞內的信號傳導，起到調控基因表達和生物效應的作用。RET受體蛋白胞內區至?少含有12個自動磷酸化的位點，含有SH2區域的連接蛋白可以識別并結合磷酸化殘基。目前已知Grb7/10結合于905位酪氨酸殘基(Y905)，磷脂酶C2γ(PLC2γ)結合于Y1015，c2Src結合于Y981,，Grb2結合于Y1096，Shc、ShcC、IRS1/2、FRS2和DOK1/4/5結合于Y1062。其中1062位酪氨酸殘基對RET的活化非常重要。當結合蛋白Shc和磷酸化的Y1062結合后，促使Grb2/Grb1和Grb22Sos復合物的形成，繼而分別激活P?I3K/AKT和RAS2/ERK途徑。RET突變導致受體獨立于配體結合而持續激活、磷酸化和下游信號的異常激活。?

MEN2主要由原癌基因RET突變所致，為更早的檢出遺傳型患者，美國甲狀腺協會（ATA）推薦對于所有甲狀腺髓樣癌患者進行RET基因檢測，以區分遺傳性或散發性患者，使遺傳性MTC患者能提早發現，早期治療，以使患者得到更多的獲益，但在MEN2的其他腫瘤組分如PCC、PHPT中是否也應進行RET篩查尚未得出結論。?

發明內容

本發明的目的是提供RET原癌基因634多態性位點在制備篩選多發性內分泌腫瘤2A型藥物中的應用。?

本發明的另一個目的是提供RET原癌基因634多態性位點在制備診斷多發性內分泌腫瘤2A型藥物中的應用。?

所述634多態性位點為rs75076352、rs75996173。?

在20世紀90年代初，通過DNA直接測序發現，定位于10號染色體長臂的RET原癌基因突變是MEN2的致病原因。RET共受體(GFRα)是一組通過糖磷脂酰肌醇(GPI)連接定位于細胞膜表面的蛋白家族。GDNF等配體先與共受體結合形成GFL/GFRα復合物，然后受體二聚化使兩個RET分子相互靠近，使胞漿內的酪氨酸殘基磷酸化，從而最終觸發細胞內的信號傳導，起到調控基因表達和生物效應的作用。?

MEN2A是MEN2的最為常見的類型，其突變位點主要為634位點和10號外顯子的609、611、618、620密碼子，他們編碼胞外的半胱氨酸富集區，對蛋白質形成和受體二聚體化起到重要作用，突變后可使得受體二聚體化而促發胞內的酪氨酸殘疾磷酸化，激活下游的信號傳導，634位點更為接近細胞膜；768密碼子則為編碼胞內的酪氨酸激酶區，突變后使得酪氨酸自身磷酸化，并通過結合?含SH2結構域的連接蛋白，激活下游PI3K/AKT或RAS/ERK通路。?