[發(fā)明專利]與gp120蛋白結(jié)合的多肽、多肽芯片、其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310298450.9
• 申請日: 2013-07-16
• 公開（公告）號: CN104292304B
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琛;王晨軒;王艷梅;朱勁松;楊延蓮
• 申請（專利權(quán)）人: 國家納米科學(xué)中心
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K14/00;C40B40/10;C40B50/18;G01N33/68;G01N33/569;A61K38/10;A61K38/16;A61P31/18
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及與gp120蛋白結(jié)合的多肽、多肽芯片、其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

獲得性免疫缺陷綜合征（Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS）是因為感染人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）而導(dǎo)致免疫缺陷，并發(fā)一系列機(jī)會性感染及腫瘤等的綜合征。它是一類流行較廣，致死率高的疾病。在當(dāng)前仍然缺少普適的治療方法的情況下，盡早地發(fā)現(xiàn)人類免疫缺陷病毒，及時地診斷病癥，阻斷傳播途徑，對于減少其危害有著重要的意義。

HIV可以感染多種細(xì)胞，包括在表面表達(dá)CD4分子的T4淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等。CD4分子是HIV入侵細(xì)胞的受體，而糖蛋白gp120在HIV識別CD4分子的過程中，發(fā)揮著重要的作用。位于HIV囊膜上的gp120分子會與CD4分子結(jié)合，使跨膜糖蛋白gp41發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變。gp41使HIV與靶細(xì)胞膜融合，從而病毒的核衣殼進(jìn)入細(xì)胞。此外，游離的gp120分子還能激活體內(nèi)過量的T細(xì)胞及其他的主要免疫細(xì)胞，加速HIV病毒的入侵。故gp120分子可能是診斷HIV相關(guān)疾病的重要靶標(biāo)分子。以gp120分子為藥物設(shè)計靶點，可能是實現(xiàn)對HIV有效檢測與治療免疫缺陷綜合征的一種途徑。

基于gp120的分子結(jié)構(gòu)，目前已經(jīng)開發(fā)出了多種相關(guān)的抑制劑與單克隆抗體，并有些基于這些抗體的芯片產(chǎn)生。但是目前用于檢測gp120蛋白的單克隆抗體芯片存在以下問題：

（1）使用的單克隆抗體與gp120蛋白的相互作用力較弱，造成對gp120蛋白的檢出限較低，傳統(tǒng)的gp120單克隆抗體制備的芯片檢出限高于35nM；

（2）由于僅基于一種或少數(shù)幾種gp120單克隆抗體的陽性結(jié)果進(jìn)行判斷，導(dǎo)致實驗過程中較多假陽性結(jié)果的產(chǎn)生；

（3）gp120單克隆抗體芯片很容易因抗體的構(gòu)象變化導(dǎo)致抗體失活，芯片失效；

（4）gp120單克隆抗體的成本較高，導(dǎo)致gp120單克隆抗體芯片的成本難以降低，大規(guī)模應(yīng)用受到限制。

因此，針對gp120蛋白，開發(fā)出檢出限低、特異性高、性能穩(wěn)定及成本較低的芯片，對于HIV病毒的檢測具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明人經(jīng)過大量實驗和創(chuàng)造性勞動，得到了一組多肽，并發(fā)現(xiàn)這組多肽與gp120蛋白有很強(qiáng)的特異性結(jié)合能力，能夠制備成多肽芯片或藥物組合物等，應(yīng)用于診斷或輔助性診斷HIV感染引起的疾病。

本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

在第一方面，本發(fā)明提供一種與gp120蛋白結(jié)合的多肽，所述多肽具有選自SEQ ID NO：1～9所示的氨基酸序列：

（1）GGSRADAYRTRVDN（SEQ ID NO：1）；

（2）GGTDACVPTRPNPQRV（SEQ ID NO：2）；

（3）GGSLWRQSLDPCV（SEQ ID NO：3）；

（4）GGVDLTPLCVSLDCTRLDN（SEQ ID NO：4）；

（5）GGPDVSFRPIPIDY（SEQ ID NO：5）；

（6）GGLARRRVVIDSANFTRNADTII（SEQ ID NO：6）；

（7）GGNNDTIIFDQSSGGRPRIVTDS（SEQ ID NO：7）；

（8）GGCDIDQIINMWQDVGDAMY（SEQ ID NO：8）；和

（9）GGSRIFDPGGGRM（SEQ ID NO：9）。

所述多肽可以通過人工化學(xué)合成制得，其與gp120蛋白有很強(qiáng)的特異性結(jié)合能力。

在第二方面，本發(fā)明提供一種多肽芯片，其包括固定于固相載體上的、能夠與gp120蛋白結(jié)合的多肽，所述多肽具有選自SEQ ID NO：1～9所示的氨基酸序列。

所述多肽芯片上的多肽與gp120蛋白有很強(qiáng)的特異性結(jié)合能力，可以用于gp120蛋白的檢測，并據(jù)此判斷HIV病毒的感染情況。

在本發(fā)明一個實施方案中，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1～9所示，即包含上述九條多肽。

在第三方面，本發(fā)明提供一種如第二方面所述的多肽芯片的制備方法，利用表面等離激元共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)原理，所述方法包括：

（1）對固相載體進(jìn)行預(yù)處理，形成備用固相載體；

（2）將稀釋好的所述多肽點樣到所述備用固相載體上。