[發(fā)明專利]核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列在制備抑制卵巢癌細(xì)胞生長藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310298411.9
• 申請(qǐng)日: 2013-07-16
• 公開（公告）號(hào): CN103417985A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅松濱;金焰;秦穎;吳楠;孟祥寧;孫文靖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;C12N15/113;C12N15/63;C12N15/66;A61P35/00;A61P15/08
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

1.核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列在制備抑制卵巢癌細(xì)胞生長藥物中的應(yīng)用。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2或SEQ?ID?NO.3所示。

3.核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列，其特征在于所述的核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2或SEQ?IDNO.3所示。

4.一種表達(dá)載體，其特征在于含有權(quán)利要求3所述的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于所述的表達(dá)載體是以載體pSUPER.retro.puro為基礎(chǔ)載體構(gòu)建得到的。

6.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)載體，其特征在于所述的表達(dá)載體是通過以下方法構(gòu)建得到的：

（1）合成以下含有核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列的寡核苷酸序列：

hRPL22L1-SiR+:GATCCCCAAGAAATACCTTAAGAAGAACTTCAAGAGAGTTCTTCTTAAGGTATTTCTTTTTTTA

hRPL22L1-SiR-:AGCTTAAAAAAAGAAATACCTTAAGAAGAACTCTCTTGAAGTTCTTCTTAAGGTATTTCTTGGG；

或

hRPL22L1-SiR+:GATCCCCAAAATCTTTTATGTACTCAGGTTCAAGAGACCTGAGTACATAAAAGATTTT?TTTTTA

hRPL22L1-SiR-:AGCTTAAAAAAAAATCTTTTATGTACTCAGGTCTCTTGAACCTGAGTACATAAAAGATTTT?GGG；

或

hRPL22L1-SiR+:GATCCCCAAAGTGCTGATTATAGCTGTGTTCAAGAGACACAGCTATAATCAGCACTTT?TTTTTA

hRPL22L1-SiR-:AGCTTAAAAAAAAGTGCTGATTATAGCTGTGTCTCTTGAACACAGCTATAATCAGCACTTT?GGG；

（2）寡核苷酸退火：

反應(yīng)條件：95℃5min；80℃10min；70℃10min；60℃10min；50℃10min；37℃10min；獲得含有核糖體蛋白類似物RPL22L1的反義核苷酸序列的寡核苷酸片段；

（3）pSUPER.retro.puro載體線性化：

用BglⅡ、HindⅢ兩種內(nèi)切酶對(duì)pSUPER.retro.puro進(jìn)行雙酶切，獲得線性質(zhì)粒載體；

（4）步驟（2）得到的寡核苷酸片段與線性化的表達(dá)質(zhì)粒pSUPER.retro.puro連接重組，獲得pSUPER-shRNA-RPL22L1重組質(zhì)粒；

（5）pSUPER-shRNA-RPL22L1重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5a細(xì)胞中，涂于含氨芐平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)后挑取陽性菌落搖菌培養(yǎng)，提取pSUPER-shRNA-RPL22L1重組質(zhì)粒DNA，即得。

7.一種宿主細(xì)胞，其特征在于含有權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體。

8.權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體在制備抑制卵巢癌細(xì)胞生長藥物中的應(yīng)用。