[發明專利]一種基于特異引物鑒定5種常見儲糧扁谷盜的試劑盒

有效

• 申請號: 201310298148.3
• 申請日: 2013-07-16
• 公開（公告）號: CN103952463A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 李志紅;王一椒
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于鑒定或輔助鑒定儲糧扁谷盜的試劑盒，包括如下5個引物對中的至少一對：

（1）由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對1；

（2）由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對2；

（3）由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對3；

（4）由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的引物對4；

（5）由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的引物對5。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中組成每個引物對的兩條單鏈DNA的摩爾數相等。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述儲糧扁谷盜為如下中的至少一種：銹赤扁谷盜、長角扁谷盜、微扁谷盜、土耳其扁谷盜和開普扁谷盜。

4.權利要求1-3中任一所述試劑盒的制備方法，包括如下步驟：將組成所述試劑盒中各引物對的各單鏈DNA分別單獨包裝后，與下述物質中的至少一種包裝在同一試劑盒內：PCR反應緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。

5.鑒定或輔助鑒定儲糧扁谷盜的方法，為如下（a）-（e）中的任一種：

（a）鑒定或輔助鑒定待測儲糧扁谷盜是否為銹赤扁谷盜的方法，包括如下（a1）和（a2）的步驟：

（a1）以所述待測儲糧扁谷盜的基因組DNA為模板，用由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對1進行PCR擴增；

（a2）檢測步驟（a1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測儲糧扁谷盜是否為銹赤扁谷盜：若所述PCR產物中含有158bp的DNA片段，則所述待測儲糧扁谷盜為或候選為銹赤扁谷盜；反之，則所述待測儲糧扁谷盜不為或候選不為銹赤扁谷盜；

（b）鑒定或輔助鑒定待測儲糧扁谷盜是否為長角扁谷盜的方法，包括如下（b1）和（b2）的步驟：

（b1）以所述待測儲糧扁谷盜的基因組DNA為模板，用由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對2進行PCR擴增；

（b2）檢測步驟（b1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測儲糧扁谷盜是否為長角扁谷盜：若所述PCR產物中含有371bp的DNA片段，則所述待測儲糧扁谷盜為或候選為長角扁谷盜；反之，則所述待測儲糧扁谷盜不為或候選不為長角扁谷盜；

（c）鑒定或輔助鑒定待測儲糧扁谷盜是否為微扁谷盜的方法，包括如下（c1）和（c2）的步驟：

（c1）以所述待測儲糧扁谷盜的基因組DNA為模板，用由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對3進行PCR擴增；

（c2）檢測步驟（c1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測儲糧扁谷盜是否為微扁谷盜：若所述PCR產物中含有585bp的DNA片段，則所述待測儲糧扁谷盜為或候選為微扁谷盜；反之，則所述待測儲糧扁谷盜不為或候選不為微扁谷盜；

（d）鑒定或輔助鑒定待測儲糧扁谷盜是否為土耳其扁谷盜的方法，包括如下（d1）和（d2）的步驟：

（d1）以所述待測儲糧扁谷盜的基因組DNA為模板，用由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的引物對4進行PCR擴增；

（d2）檢測步驟（d1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測儲糧扁谷盜是否為土耳其扁谷盜：若所述PCR產物中含有355bp的DNA片段，則所述待測儲糧扁谷盜為或候選為土耳其扁谷盜；反之，則所述待測儲糧扁谷盜不為或候選不為土耳其扁谷盜；

（e）鑒定或輔助鑒定待測儲糧扁谷盜是否為開普扁谷盜的方法，包括如下（e1）和（e2）的步驟：

（e1）以所述待測儲糧扁谷盜的基因組DNA為模板，用由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的引物對5進行PCR擴增；

（e2）檢測步驟（e1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測儲糧扁谷盜是否為開普扁谷盜：若所述PCR產物中含有289bp的DNA片段，則所述待測儲糧扁谷盜為或候選為開普扁谷盜；反之，則所述待測儲糧扁谷盜不為或候選不為開普扁谷盜。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟（a）-步驟（e）中，所有的所述進行PCR擴增的退火溫度均為50℃。