[發明專利]乳酸鏈球菌的發酵工藝

有效

• 申請號: 201310297621.6
• 申請日: 2013-07-16
• 公開（公告）號: CN103540541A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 豐來;呂黎;羅志威;徐麗媛;嚴征
• 申請（專利權）人: 湖南泰谷生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/46
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.乳酸鏈球菌的發酵工藝，其特征在于，將乳酸鏈球菌（Streptococcus?lactis）在改良MRS固體培養基上進行傳代培養，然后將活化后的乳酸鏈球菌接種到液體種子培養基中進行靜止培養，所得種子液按2～5%的接種量接種到發酵培養基中，經過擴大培養得到乳酸鏈球菌發酵液；

其中，所述發酵培養基的配方為：豆粕粉15～25g/L、玉米粉10～20g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、番茄汁50mL/L、磷酸二氫鉀2g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L，pH值6.2～6.9；發酵培養條件為：30～35℃，溶解氧0%，間歇式旋轉環境中培養20～45h。

2.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，所述改良MRS固體培養基的配方為：葡萄糖10～20g/L、蛋白胨10～15g/L、酵母膏5～7.5g/L、牛肉膏10～15g/L、磷酸二氫鉀0.2g/L、乙酸鈉2g/L、檸檬酸三胺2g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L、瓊脂18g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；所述傳代培養是指將乳酸鏈球菌菌株接種到改良MRS固體斜面培養基上，于30～35℃培養3～5天。

3.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，所述液體種子培養基的配方為：豆粕粉15～25g/L、玉米粉10～20g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、牛肉膏3～5g/L、磷酸二氫鉀0.2～2g/L、乙酸鈉2～5g/L、檸檬酸三胺2g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；靜止培養的條件為：30～35℃，每隔6h搖瓶一次，靜止培養18～24h。

4.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，所述擴大培養是指進行三級發酵：將種子液按2～5%的接種量接種到100L發酵罐中進行發酵培養，發酵完成后，將該罐發酵液全部轉接入1000L發酵罐中，繼續發酵培養，完成后，將1000L罐中發酵液全部轉接入10000L發酵罐中進行發酵培養，得到發酵產物；其中，各發酵罐的裝液量為60～70%。

5.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，所述發酵培養基中添加的番茄汁，其制備方法為：番茄清洗后置于90～95℃水中5～10min，然后將番茄剝皮后榨汁，調pH值6.2～6.9，100～110℃高壓蒸汽滅菌10～15min，即得。

6.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，所述乳酸鏈球菌為ACCC10295。

7.乳酸鏈球菌菌劑的制備方法，將根據權利要求1-6任一項所述發酵工藝制備的乳酸鏈球菌發酵液與保護劑混合，然后將所述混合物用海藻酸鈉溶液進行包埋處理，冷凍干燥后，即得乳酸鏈球菌菌劑；

其中，所述保護劑為純度在99%以上的大豆粉。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，將乳酸鏈球菌發酵液與滅菌后的大豆粉按1:3～6的重量比混合。

9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述包埋處理具體為：將所述混合物與3～5%的海藻酸鈉溶液按1:3～5的重量比混合。

10.根據權利要求7-9任一項所述方法制備的乳酸鏈球菌菌劑。