[發明專利]草分枝桿菌及其免疫增強劑的制備方法

有效

• 申請號: 201310296734.4
• 申請日: 2013-07-15
• 公開（公告）號: CN103396958A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 周慶豐;余國蓮;杜云平;梁健良;林麗苗;王雷;宋延華
• 申請（專利權）人: 廣東溫氏食品集團股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/74;A61P37/04;C12R1/32
• 代理公司: 深圳匯智容達專利商標事務所(普通合伙) 44238
• 代理人: 劉新年

1.一種草分枝桿菌的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）采用斜面培養基活化草分枝桿菌；

（2）將活化的草分枝桿菌采用種子培養基進行種子培養，得到種子液；

（3）按3-6%的接種量（v/v）將上述種子液接種到發酵培養基中，通氣培養48-50h，得到草分枝桿菌發酵液；

所述斜面培養基的配方為：大豆蛋白胨5-10g/L，酵母膏3-8g/L，葡萄糖2-5g/L，硫酸鎂0.4-0.6g/L，磷酸氫二鉀0.4-0.6g/L，磷酸二氫鉀0.4-0.6g/L，氯化鈣0.4-0.6g/L，瓊脂15-20g/L，pH7.3-7.5；

所述種子培養基的配方為：大豆蛋白胨5-10g/L，酵母膏5-10g/L，葡萄糖5-10g/L，硫酸鎂0.4-0.6g/L，磷酸二氫鉀0.4-0.6g/L，磷酸氫二鉀0.4-0.6g/L，氯化鈣0.4-0.6g/L，甘油1-5g/L，pH7.3-7.5；

所述發酵培養基的配方為：大豆蛋白胨5-10g/L，酵母膏5-10g/L，葡萄糖5-10g/L，硫酸鎂0.4-0.6g/L，磷酸二氫鉀0.4-0.6g/L，磷酸氫二鉀0.4-0.6g/L，氯化鈣0.4-0.6g/L，甘油5-10g/L，pH7.3-7.5。

2.根據權利要求1所述的草分枝桿菌的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，在28-37℃，靜置培養72-96h進行活化。

3.根據權利要求1所述的草分枝桿菌的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，在28-37℃，轉速200rpm條件下進行種子培養。

4.根據權利要求1所述的草分枝桿菌的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，在28-37℃，轉速150rpm，通氣比為1：0.8-1.2的條件下進行發酵培養。

5.一種草分枝桿菌免疫增強劑的制備方法，其特征在于：將權利要求1-4任一項所述的制備方法得到的草分枝桿菌的發酵液滅活，離心收集菌體，用PBS清洗2-3次，再與適量PBS、0.5-1%SDS混合均勻，進行高壓均質破碎，離心超濾即制成免疫增強劑。

6.根據權利要求5所述的草分枝桿菌免疫增強劑的制備方法，其特征在于：所述草分枝桿菌免疫增強劑的濃度為10-20%。

7.根據權利要求5所述的草分枝桿菌免疫增強劑的制備方法，其特征在于：向所述草分枝桿菌免疫增強劑中添加0.01%的硫柳汞（v/v）。

8.一種權利要求5-7任一項所述制備方法制備的草分枝桿菌免疫增強劑。