[發明專利]一種鑒定子鼠基因型的PCR方法

有效

• 申請號: 201310296488.2
• 申請日: 2013-07-15
• 公開（公告）號: CN103436603A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 周宇荀;管清華;肖君華;李凱
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于小鼠遺傳學領域，特別涉及一種鑒定子鼠基因型的PCR方法。

背景技術

性發育是指個體性成熟并獲得生殖能力的過程。下丘腦-垂體-性腺軸系統的重新激活對哺乳動物性發育的啟動起著決定性的作用。該性狀是一個復雜性狀，在個體水平上受多種遺傳因素和環境因素的影響。性發育的啟動除了受個體本身的基因型影響外，還受到母體效應的影響。母體效應主要包含兩方面的因素，胚胎發育的子宮環境以及由于父本及母本來源的不同所產生的基因印跡的影響。

流行病學調查發現，母親的身高能直接影響胎兒的大小，同母異父的同胞出生體重的相似性小于同父異母的同胞的出生體重（Gluckman?PD,Hanson?MA(2004),Maternal?constraint?of?fetal?growth?and?its?consequences.,Semin?Fetal?Neonatal?Med9:419–425）；另外，試管嬰兒的出生體重只與受體母親的體重有關而與供卵母親的體重無關（Brooks?AA,Johnson?MR,Steer?PJ,Pawson?ME,Abdalla?HI(1995),Birth?weight:nature?or?nurture?Early?Hum?Dev42:29–35）。大鼠實驗顯示，在妊娠過程中給予母鼠低蛋白飲食，會導致雌性后代陰門開啟時間延遲；而以6-不飽和脂肪酸喂飼妊娠期雌鼠，其雌性后代的陰門開啟時間提前；而給妊娠期雌鼠注射雌激素，會導致其雌性后代的性發育時間提前并增加患乳腺癌的風險（Hilakivi-Clarke?L,Clarke?R,Onojafe?I,Raygada?M,CHO?E,Lippman?M,(1997)A?maternal?diet?high?in?n26polyunsaturated?fats?alters?mammary?gland?development,puberty?onset,and?breast?cancer?risk?among?female?rat?offspring?Proc.Natl.Acad.Sci.USA.94:9372–9377）。

早期胚胎中基因的表達還受到基因印跡的調控，基因印記對個體出生前后的發育，行為和疾病都發揮作用。有研究表明，小鼠的父源性印跡基因Pge1表現出很強的方向性和親源效應，父系為Pge1（中胚層特異性轉錄的）突變的小鼠表現出發育遲緩，而且雌性多為不育，而這種表型與其本身的基因型無關（Lefebvre,L.,S.Viville,S.C.Barton,F.Ishino,E.B.Keverne?et?al.,(1998),Abnormal?maternal?behaviour?and?growth?retardation?associated?with?loss?of?the?imprinted?gene?Mest.Nat.Genet.20:163–169）。與此相似的是小鼠父源性基因3的突變會影響子代的胚胎發育和出生后的生長（Curley,J.P.,S.Barton,A.Surani?and?E.B.Keverne,(2004),Coadaptation?in?mother?and?infant?regulated?by?a?paternally?expressed?imprinted?gene.Proc.R.Soc.Lond.Ser.B271:1303–1309）。

目前，研究性發育調控的母體因素多從營養學角度來進行，一般采用對孕期母本的營養攝入改變或激素藥物暴露來研究胚胎發育環境對子代出生后性狀的影響，沒有涉及母本基因背景的影響研究。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種鑒定子鼠基因型的PCR方法，該方法通過鑒定子代小鼠母本，比較子代表型差異，將母體效應和基因類型聯系起來，補充了以往研究中通過改變孕鼠的營養狀況或藥物激素暴露等方式，從環境因素揭示母體效應的不足，擴展了人們對母體效應的遺傳學機制的認識。

本發明的一種鑒定子鼠基因型的PCR方法，包括：

（1）通過Blast兩種品系小鼠的線粒體序列，找到4個SNP位點，選取其中一個位點以子代小鼠線粒體DNA為模板進行PCR擴增；其中，PCR引物為：

上游引物：5’-CATTCTTCATGGCTACTGGATTC-3’；

下游引物：5’-TGCTCATGGTAGTGGAAGTAGAA-3’；