[發明專利]CCDC72基因及其表達產物在制備診斷及治療卵巢癌制劑中的應用

無效

• 申請號: 201310296173.8
• 申請日: 2012-02-25
• 公開（公告）號: CN103352081A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 徐叢劍;張志剛;俞弋;李軍
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬婦產科醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/577
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本申請發明名稱：CCDC72基因及其表達產物在制備診斷及治療卵巢癌制劑中的應用，申請號：2012100441024,?申請日：2012年02月25日。

技術領域

本發明屬分子生物學特別是基因診斷領域，具體涉及一種新的腫瘤相關抗原CCDC72基因及其表達產物和在制備診斷和治療卵巢癌制劑中的應用。

背景技術

研究顯示，在女性生殖器官的惡性腫瘤中，卵巢癌其發病率居第三位，病死率居于首位。卵巢癌是一種形態學和生物學上均具有異質性的疾病，其分型繁多，同時其發生發展及轉移是一個涉及多基因、多信號通路調控的網絡體系。據報道，目前全世界每年約有二十萬以上的婦女飽受卵巢癌折磨。盡管已有很多研究表明，不同亞型的卵巢癌分子機制分析差異明顯，但目前臨床上仍將不同亞型的卵巢癌作為一個單一的整體診斷和治療，這無疑會降低診斷的敏感性和治療的有效性。臨床實踐顯示，卵巢癌患者普遍存在復發率高、5年生存率低的狀況，而該疾患起病隱匿且缺乏有效準確的診斷標志物是重要影響因素。目前臨床上診斷卵巢癌的三種主要的傳統的檢查方法，即：結合臨床表現進行盆腔檢查、經陰道超聲檢查、血清檢測CA125水平各具優勢，但均存在局限性和缺陷。免疫組化染色診斷成為重要的輔助診斷方法。因此，迫切需要尋找一種能夠早期診斷卵巢癌的標志物及有效的靶向治療方法。

現有技術公開了CCDC72（coiled-coil?domain?containing-72）基因，最初是從體外凝集性生長狀態下的毛乳頭細胞（DPC）中篩選并克隆出的一種造血干細胞分化相關基因，其產物為7.06?kKD小分子可溶性蛋白。該基因在人體多種組織器官中表達，特別是一些新陳代謝旺盛的組織，如皮膚、腫瘤、淋巴組織等。這種分布特征提示，該基因可能與細胞增殖、分化有關。

目前，有關CCDC72的研究極少，其生物學功能不甚明確。迄今為止，僅有研究顯示，RNA干擾技術使CCDC72基因在毛乳頭細胞（DPC）中的表達減弱或消失后，DPC生長速度明顯減慢，細胞失去凝集性生長特性，CCDC72重組蛋白可促進DPC的增殖及DNA合成。尚未見有關CCDC72基因在上皮性卵巢癌中的表達和功能的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種新的卵巢癌診斷標志物和藥物治療靶點，具體涉及CCDC72基因及其表達產物作為腫瘤標志物和藥物療靶點以及基于CCDC72及其表達產物的應用。該應用比現有技術檢測省時、靈敏度與準確度更高、成本更低、和/或更高效。

另外，本發明還提供了用于這些應用的試劑盒以及引物對等。

具體而言，在第一方面，本發明提供了CCDC72基因及其表達產物可作為腫瘤標志物和藥物治療靶點。

本發明中：

1，采用免疫組織化學方法檢測CCDC72在卵巢組織中的表達，結果顯示：CCDC72的表達與卵巢組織的惡性程度有關，惡性程度越高，CCDC72表達越高；CCDC72的表達與不同卵巢癌的組織學分型有關，CCDC72在黏液性腺癌中的陽性表達率為42.4%（14/33），明顯低于漿液性腺癌的陽性表達率96.4%（106/110）和子宮內膜樣腺癌的陽性表達率88.9%（56/63），差異具有統計學意義（P＜0.001)。

2，檢測不同組織學來源的卵巢癌細胞系中CCDC72?mRNA水平，結果顯示，CCDC72在不同的細胞系中表達具有差異性，其中漿液性腺癌細胞系普遍高表達CCDC72，尤其是SKOV3ip細胞系。

3，采用RNA干擾技術檢測CCDC72對卵巢癌細胞凋亡的影響，結果顯示，與陰性對照組（NC）相比，siRNA-1、siRNA-2分別轉染SKOV3ip及OVCA433細胞48h，干擾效率均可達到50%及以上，SKOV3ip細胞系的干擾效果優于OVCA433細胞；采用Annexin?V-FITC/PI?染色細胞流式方法檢測CCDC72基因對細胞凋亡的作用，結果證實，siRNA-1組與siRNA-2組細胞凋亡率均明顯升高，差異具有統計學意義。?

，檢測CCDC72對卵巢癌細胞周期的影響，結果顯示，與NC組相比，CCDC72?siRNA-1、siRNA-2組的細胞數在G0/G1、S期增多，G2/M期降低，結果表明，干擾CCDC72基因后會誘導SKOV3ip細胞阻滯在G0/G1、S期，促進細胞凋亡。

，檢測CCDC72對卵巢癌細胞增殖能力的影響，結果表明，干擾CCDC72基因在卵巢癌細胞中的表達可以抑制卵巢癌細胞的生長。