[發明專利]一種節水抗旱稻花藥的培養方法

無效

• 申請號: 201310294408.X
• 申請日: 2013-07-15
• 公開（公告）號: CN103416304A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 李天菲;林田;高歡;吳金紅;劉國蘭;葉水烽;黃靜艷;尹玉;周麗
• 申請（專利權）人: 上海市農業生物基因中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種節水抗旱稻花藥的培養方法,其步驟包括外植體的選擇,外植體的消毒與接種,愈傷組織誘導與增殖,愈傷組織分化，組培苗生根培養與移栽，其特征在于，所述花藥愈傷組織誘導的培養基配方為M8基本培養基?+?2,4-D?2.0mg·L^-1?+?NAA?3.0mg·L^-1?+?KT?1?mg·L^-1，附加水解酪蛋白300?mg·L^-1，脯氨酸300?mg·?L^-1，谷氨酰胺500?mg·L^-1，麥芽糖55g·L^-1，植物凝膠（phytagel）?3.8g·L^-1，pH為6.0。

2.根據權利要求1所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述花藥愈傷組織分化培養基配方為MS基本培養基?+?6-BA?2.0?mg·L^-1?+?KT?2.0?mg·L^-1?+?IAA?0.2?mg·L^-1?+?NAA?0.2?mg·L^-1,附加山梨醇10g·L^-1，水解酪蛋白1.0g·L^-1,麥芽糖30g?L^-1,?植物凝膠（phytagel）?3.8g·L^-1，pH為6.0。

3.根據權利要求1所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述組培苗生根培養與移栽培養基配方為1/2MS?+?0.1NAA?mg·L^-1，蔗糖20g·L^-1，植物凝膠（phytagel）3.8g·L^-1，pH為6.0，生根培養條件為光照強度5000-6000Lux,光照周期為12h/d，培養溫度為25℃。

4.根據權利要求1所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述外植體選取花粉發育時期為單核中期到晚期的水稻幼穗。

5.根據權利要求1或4所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述外植體的消毒與接種的方法是對選取的幼穗用70%酒精棉球簡單擦拭滅菌后，保濕包好，進行低溫預處理，然后剝去葉鞘，挑選幼穗花藥處于單核靠邊期的枝梗，剪成5-7cm的小段，用次氯酸鈉和雙氧水滅菌處理，然后用剪穎倒花藥法接入愈傷誘導培養基，進行熱激處理。

6.根據權利要求5所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述熱激處理方法為將剛接種好的愈傷轉到30-32℃暗培養箱，熱激處理24小時，以提高出愈率。

7.根據權利要求5所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述低溫預處理的方法為將花粉發育時期為單核中期到晚期的幼穗，用70%酒精棉球擦拭葉片和葉鞘，保留前1-2張葉片，然后用潮濕的紗布和塑料薄膜依次包好，包好的幼穗放在7-9℃冰箱中低溫處理7-9天。

8.根據權利要求5所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述外植體的消毒是將枝梗剪為5-7厘米的小段，用70%酒精浸泡30-60秒進行表面消毒，再依次用新鮮配制的1-1.5％次氯酸鈉滅菌20min，3％雙氧水滅菌10min，期間上下倒置振蕩滅菌瓶幾次，最后無菌水沖洗4－5次。

9.根據權利要求1所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述愈傷組織誘導是在培養溫度為25℃、光照強度為3000-4000lux,光照周期為12h/d的條件下半光倒扣培養15-20天，至花藥愈傷開始長出后，再轉到25℃條件下繼續暗培養10-15天。

10.根據權利要求1所述的節水抗旱稻花藥的培養方法，其特征在于，所述愈傷組織分化是在光照培養溫度為25℃，光照強度5000-6000lux,光照周期為14h/d，光照培養時間30-40天，直至長出小苗。