[發(fā)明專利]一種基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310293950.3
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103333967A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張何;傅昕;劉漣;朱振軍
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南工程學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/28
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務(wù)所 43108
• 代理人: 宋向紅

1.一種基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）通過生物素-親合素結(jié)合方法將設(shè)計(jì)的特異性捕獲探針和電子富集蛋白固定于微球表面形成功能化微球，并將該微球固定在微流控芯片檢測區(qū)的相應(yīng)微結(jié)構(gòu)中，形成微流控微珠陣列檢測芯片；

（2）將辣根過氧化物酶和檢測探針修飾到納米顆粒上作為信號標(biāo)記；

（3）將目標(biāo)核酸序列及步驟（2）形成的功能化納米顆粒流入微流控微珠陣列檢測芯片的檢測區(qū)與微珠陣列反應(yīng)，功能化微球可以特異性地識別及捕獲目標(biāo)核酸序列，并與功能化納米顆粒探針形成三明治結(jié)構(gòu)；

（4）通過多酶納米信號放大技術(shù)將生物素化的酪胺結(jié)合到微球表面的電子富集蛋白上，洗脫后流入親合素標(biāo)記的量子點(diǎn)，該量子點(diǎn)能與微球表面電子富集蛋白上結(jié)合的生物素識別并固定，通過熒光進(jìn)行定量檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：步驟（1）中所述的微流控微珠陣列檢測芯片包含兩個(gè)聚二甲基硅氧烷微流控芯片即PDMS片基，第一PDMS片基的微結(jié)構(gòu)陣列覆蓋通道的尺寸為100～300微米寬、1000～3000微米長、5～15微米深；第二PDMS片基的微珠固定微結(jié)構(gòu)陣列由10～20個(gè)單獨(dú)的小室構(gòu)成，其中單個(gè)小室的尺寸為100～150微米寬、100～150微米長、30～50微米深。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：步驟（1）中所述的微球是二氧化硅微球、聚苯乙烯類有機(jī)聚合物微球、磁性微球和生物大分子聚合物微球中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：所述的微珠尺寸為10～30微米。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：步驟（1）中所述的電子富集蛋白為羥苯基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯修飾的酪蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：步驟（2）中所述的納米顆粒為金納米顆粒、二氧化硅納米顆粒和聚苯乙烯納米顆粒中的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于微流控微珠陣列芯片的核酸檢測方法，其特征在于：步驟（4）中所述的量子點(diǎn)為CdSe、CdTe、CdS和復(fù)合型量子點(diǎn)中的一種，其發(fā)射范圍為400nm～700nm。