[發明專利]一株雜交瘤細胞及其應用

無效

• 申請號: 201310293499.5
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103320391A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 楊慧;段春禮;王屹;刑昊;魯玲玲;趙春禮
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一株雜交瘤細胞及其應用。

背景技術

帕金森氏病(PD)是臨床上最常見的神經系統退行性疾病之一，我國的PD患者人數超過百萬。隨著社會的老齡化，該病的發病人數呈逐年增多趨勢，嚴重地影響著老齡人口的生存質量，給家庭和社會帶來沉重負擔。該病病因不清，臨床上尚無有效的治愈方法。它的主要病理特征是多巴胺能神經元進行性、選擇性缺失和路易小體(Lewy小體)的形成。目前已有研究證明，路易體的主要構成成分是纖維化聚集的α-突觸核蛋白（α-SYN），且其中90%以上以磷酸化的形式存在，明顯高于正常人4%的水平。

α-突觸核蛋白是一種由126個氨基酸組成的相對分子質量18000-20000蛋白質，由4號染色體上的單基因編碼，由7個外顯子組成。該蛋白存在于神經元，尤其是突觸前末梢。α-突觸核蛋白在全身各組織和器官中均有表達。在腦內，主要存在于新皮質，海馬和黑質。正常時α-突觸核蛋白是一種天然不折疊并可溶的蛋白質，其易發生自身異常聚集。若聚集過度，超過細胞自身蛋白酶的抗聚集能力，將最終形成Lewy小體及Lewy軸突。線粒體復合物I的功能紊亂、氧化應激及蛋白過量表達等刺激因素都會促進α-突觸核蛋白堆積。α-突觸核蛋白的不溶性的異常堆積和其不能正常的被降解都會導致神經性退化，最終導致神經元死亡和神經功能障礙，從而誘發PD。

2000年首次報道了Lewy體中的α-突觸核蛋白129位點絲氨酸可被casein?kinase（CK1）、CK2和G蛋白偶聯受體激酶(Gprk)磷酸化。之后有文獻報道在包括PD的α-突觸核蛋白相關退行性病變中，α-突觸核蛋白129位點的絲氨酸均呈選擇性高度磷酸化水平狀態，遠遠超過在正常生理情況下該蛋白的磷酸化水平。通過雙向電泳、質譜等技術也同樣證實在帕金森患者路易氏體中α-突觸核蛋白處于高度磷酸化修飾，修飾位點僅為C端129位的絲氨酸。以上均提示α-突觸核蛋白129位絲氨酸的磷酸化修飾在PD的發病過程中可能具有重要的作用，所以近年來α-突觸核蛋白129位點絲氨酸的磷酸化如何參與PD的發病機制逐漸受到人們的關注。

發明內容

本發明的目的是提供一株雜交瘤細胞及其應用。

本發明提供的雜交瘤細胞（3H4）pS129syn（3H4），簡稱雜交瘤細胞pS129syn（3H4），已于2012年6月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號），保藏號為CGMCC?No.6178。

本發明還保護所述雜交瘤細胞pS129syn（3H4）分泌的單克隆抗體。

本發明還保護所述單克隆抗體在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為檢測磷酸化的α-SYN蛋白。

所述α-SYN蛋白可為如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

（b）將序列1的氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且由序列1衍生的蛋白質。

本發明還保護所述單克隆抗體在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為輔助鑒定帕金森病患者。

本發明還保護一種用于檢測磷酸化的α-SYN蛋白的試劑盒，包括所述單克隆抗體。

所述α-SYN蛋白可為如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

（b）將序列1的氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且由序列1衍生的蛋白質。

本發明還保護用于輔助鑒定帕金森病患者的試劑盒，包括所述單克隆抗體。

由于帕金森病確切病因復雜，尚不十分清楚，缺乏有效的預防和治療措施。而且，目前國際上還沒有關于PD早期診斷的報道，更不用談早期診斷的方法了，當PD患者有明顯的臨床表現時，其中腦黑質多巴胺能神經元已經有較多缺失，所以繼續在發病早期找到一種biomarker，早期發現處于PD潛伏期的尚未出現PD臨床癥狀的患者，以便對于PD能夠進行早期干預，提高患者的生活質量。

目前市售磷酸化α-SYN抗體較少，而且特異性不強，本發明提供的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體針對絲氨酸129位磷酸化的α-SYN具有較強的特異性，可用于檢測磷酸化α-SYN蛋白在大鼠腦中的表達、在人腦中的表達等。因此本發明提供的單克隆抗體可以用于制備試劑盒，用來診斷帕金森病。

附圖說明

圖1為實施例1中五只小鼠強化免疫后OD值比值（加血清組/PBS組）結果。

圖2為實施例4的結果。

圖3為實施例5的結果。