[發(fā)明專利]基于羧基化碳納米粒子和DNA相互作用測(cè)定溶菌酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310291615.X
• 申請(qǐng)日: 2013-07-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103399005A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 混旭;劉芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于羧基化碳納米粒子和DNA相互作用測(cè)定溶菌酶的方法，其特征是包括以下步驟：

1.1?ABEI-apt制備，在20?μL?10^-6~10^-4?M的氨基化的DNA適體溶液中加入5%戊二醛的磷酸緩沖溶液中，持續(xù)攪拌2?h（小時(shí)），再加入1~10?mg?化學(xué)發(fā)光試劑（ABEI）溶液，在室溫下攪拌過(guò)夜，轉(zhuǎn)移到棕色瓶中于陰涼處保存；

1.2?羧基化碳納米制備，將0.1~1.0?g殼聚糖溶解在10?mL水中，放入微波爐（900?W）加熱5~15分鐘（min）至溶液顏色改變，將溶液以13000?rpm離心30?min去除雜質(zhì)，再用透析袋（截留分子量3000~10000）在純凈水中對(duì)其透析，持續(xù)2~6天去除殘余殼聚糖，得碳納米粒子，將0.5~2?g制備的碳納米粒子與1.0?mL?63%的硝酸和1.0?mL二甲基甲酰胺混合后在100攝氏度下反應(yīng)8?h，然后，將產(chǎn)物利用0.22?μM超濾膜進(jìn)行過(guò)濾，將濾液離心10?min（14000?rmp條件下），并用二次蒸餾水洗滌三次，然后分散在二次蒸餾水中制備成濃度為2.0?mg/mL溶液；

1.3碳納米粒子修飾磁珠制備，在小離心管中加入10~150?μL羧基化碳納米粒子和2000?μL?0.1?M的咪唑緩沖液（pH為6.8），37℃下反應(yīng)30?min，再加入1000?μL?含0.1?M的EDC、NHS和50?μL氨基化磁珠繼續(xù)反應(yīng)12?h，然后用磷酸緩沖溶液洗三次，定容至500?μL，從而制得化學(xué)發(fā)光適體傳感器。

2.一種利用權(quán)利要求1制備的基于羧基化碳納米粒子和DNA相互作用化學(xué)發(fā)光適體傳感器檢測(cè)溶菌酶含量的方法，其特征在于：在ABEI-apt溶液中加入Mg^2?+離子，然后加入不同濃度的溶菌酶，孵育反應(yīng)；取部分該溶液，加入碳納米粒子修飾磁珠溶液中孵育反應(yīng)后，磁性分離后上清液進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)得到溶菌酶的定量信息。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)發(fā)光傳感器在檢測(cè)溶菌酶含量中的應(yīng)用。