[發明專利]一種檢測肺癌的液相芯片試劑盒

有效

• 申請號: 201310289504.5
• 申請日: 2013-07-10
• 公開（公告）號: CN103439511A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 王孝舉;馬勝林;吳國君;王聞哲;夏冰;陳雪琴
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院;杭州市第一人民醫院;橫店集團家園化工有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及醫藥生物領域，尤其涉及一種檢測肺癌的液相芯片試劑盒。?

背景技術

近年來，我國癌癥的發生率呈明顯上升趨勢，占死亡原因的20%以上，居各類死因之首。世界衛生組織預測，到2020年，將有2000萬新發癌癥病例，其中死亡人數達1200萬，且絕大多數發生在發展中國家。如果不采取任何有效的預防與控制措施，預計到2020年，我國每年的新發生癌癥總數和癌癥死亡總數將達300萬左右，患病總數將達660萬。?

肺癌目前是全球范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。近20年來，由于大力推行戒煙，歐洲和美國等西方國家男性肺癌的發病率已開始下降，但女性肺癌的發病率卻持續上升。我國是香煙生產和銷售大國，不論男性還是女性，肺癌的發病率均呈持續上升趨勢，尤以女性發病率上升更快。臨床研究表明，原位癌治愈率接近100%，Ⅰ期肺癌患者的5年生存率達60%～90%，而IIIb和Ⅳ期患者的5年生存率僅5%～20%，因此，早期診斷早期發現，早期治療是降低肺癌死亡率，延長生存期的關鍵。然而，由于缺乏理想的早期診斷方法，肺癌的早期診斷率僅14%左右。因此，如何提高肺癌早期診斷水平已成為肺癌防治工作者面臨的嚴肅而緊迫的任務。?

至今，對肺癌的檢測仍依賴于CT、MR、PET等影像檢測儀器，但實際上這些影像手段一般只能發現1-2cm以上的腫瘤，而腫瘤從病變到生長至1-2cm，一般要經過2-5年甚至更長的時間，因此，癌癥早期漏診率高達80-90%。?

目前，早期診斷癌癥的最新、最有效的方法是通過驗血尋找腫瘤標志物，特別是其中的蛋白標志。所謂腫瘤標志物，指在腫瘤發生和增殖過程中，由腫瘤細胞生物合成、釋放或者是宿主對癌類反應性的一類物質，這?類物質可能是循環物質，可在細胞、組織或體液中出現，人們能利用化學、免疫、分子生物學等技術對病人血液或分泌物定性或定量地檢測。通過對這類物質的分析，為腫瘤的預測、診斷、治療和轉移等提供信息和決策依據。?

血清腫瘤標志物的測定方法主要有放射免疫分析、酶免疫分析、化學發光免疫分析、電化學發光免疫分析等。然而，這些方法都是單指標的檢測方法，而對腫瘤進行單一標志物的檢測始終存在著特異性不強、靈敏度低等不足，導致對早期腫瘤的檢出率不高，因此可能會造成部分患者漏診。若想避免這種情況，則需要對每份標本進行多指標分析，不僅費用昂貴，而且需要的血清量較大。?

肺癌中常用的腫瘤標志物有神經元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)以及前胃泌素釋放肽(ProGRP)等。?

(1)神經特異性烯醇化酶(NSE)：烯醇化酶是一種糖酵解酶，普遍存在于哺乳動物的組織中，以系列同工酶二聚體的形式存在(αα、αβ、ββ、和γγ)。NSE為含γ亞基的同工酶，存在于神經內分泌細胞和神經源性腫瘤中(如小細胞肺癌、神經母細胞瘤、腸癌等)。小細胞肺癌(SCLC)是一種起源于神經內分泌細胞的腫瘤，因此NSE與SCLC關系密切，是小細胞肺癌的標記物。SCLC患者NSE陽性率約為60%～80%，非小細胞肺癌患者陽性率<20%。因此，NSE有助于SCLC的診斷及其與NSCLC的鑒別診斷。NSE還是肺癌化療效果觀察和隨訪的有效指標，對化療產生反應后此酶水平會下降，病情完全緩解后其可達正常水平。?

(2)細胞角蛋白19片段(CK19，Cyfra21-1)：Cyfra21-1是分子量約30kDa的上皮細胞角蛋白的可溶性成分之一，是一種非常好的鑒別肺良惡性疾病的標志物，尤其對肺鱗癌的檢測效果更好。Cyfra21-1是相對較新的腫瘤標志物，臨床上采用夾心酶聯免疫吸附法，聯合應用兩種特異性單克隆抗體(ks19.1和bm19.21)檢測血清中的細胞角蛋白19片段。Cyfra21-1存在于上皮起源的腫瘤細胞的胞漿中，當腫瘤細胞壞死后，可釋放到血清中。免疫組織化學研究表明，肺癌中富含細胞角蛋白19片段，Cyfra21-1是NSCLC最靈敏的腫瘤標志物。因為Cyfra21-1只代表細胞角蛋白19一個片段，因此Cyfra21-1比組織多肽抗原(TPA)具有更高的特異性。研究表明，Cyfra21-1在肺鱗癌中的陽性率可高達80%，而且對肺癌的診斷有較高的?特異性，它在肺良性疾病和健康人群血中的濃度很低，與性別、年齡以及吸煙習慣無關。Cyfra21-1的敏感性與腫瘤的組織學類型存在著一定的相關性，如肺鱗癌的敏感性為最高達76.5％、腺癌為47.8％、小細胞肺癌僅為42.1％。血清中Cyfra21-1的含量與肺鱗癌患者的病程呈正相關，根據肺癌的TNM分期，Ⅰ～Ⅳ期患者的敏感性分別為60.0％、88.8％、80％和100％。?