[發明專利]抗人髓系相關分化標志蛋白的單克隆抗體DS6及其應用

有效

• 申請號: 201310289480.3
• 申請日: 2013-07-10
• 公開（公告）號: CN104277096B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 李楠;曹雪濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/28;C12N5/20;G01N33/68;C12R1/91
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明涉及抗人髓系相關分化標志蛋白的單克隆抗體DS6及其應用。首次找到一種特異性抗人髓系相關分化標志蛋白(hMYADM)的單克隆抗體。所述的單克隆抗體可良好地識別hMYADM抗原，不與其它蛋白發生交叉反應，特異性和靈敏度均非常高。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，涉及抗人髓系相關分化標志(hMYADM)蛋白的單克隆抗體的制備及應用。

背景技術

造血譜系的發生是一個非常復雜的生物學過程，其特征在于基因表達的特征性改變，導致的階段特異性的表型和功能變化。造血干細胞分化異常可能導致白血病和其他血液系統疾病的發生。在過去的幾十年里，對于參與造血發生的細胞因子、生長因子及其受體和轉錄因子家族的鑒定已經取得了很大的進展。造血發生的過程可能涉及到的幾個關鍵變量，包括轉錄因子作用，染色質可接近性、生長因子受體，以及發生這些遺傳改變的細胞整體環境。然而，對多能祖細胞系的選擇的分子機制仍不清楚。對參與造血干細胞譜系發生的基因進行研究將為造血分化機制提供新的觀點，并有助于闡明許多造血障礙的發生原因。多能造血干細胞具有選擇性表達多個淋巴系或髓系細胞分化的譜系特異性程序的能力。目前認為，特定譜系造血細胞的發生涉及到一些種系特異性基因的改變。而一個或幾個調節性或“關鍵”基因的活化即可完全啟動并調控譜系特異性基因程序。因此研究造血發生中的特征性分子改變對深入闡明造血細胞的分化發育、體內遷移、生物學作用及其分子機理具有重大意義，可為認識疾病(如白血病)發生發展的機制提供新的角度，也可能為疾病的防治提供新的思路和手段。

髓系相關分化標記(MYADM)是近年來鑒定得到的一種表達在造血干細胞分化的特定階段的標志物蛋白，屬于MAL蛋白家族成員。在MYADM蛋白序列中特征性地存在8個跨膜區，形成2個MARVEL串聯排列，其優勢分布于細胞膜上。小鼠MYADM(mMYADM)在原始造血祖細胞向特定細胞誘導分化時表達上調，在向B細胞祖細胞分化的條件下表達下調。反義寡核苷酸抑制其表達可導致小鼠骨髓粒細胞集落形成的大幅減少，提示mMYADM在髓系細胞的分化過程中發揮著重要的生理作用(Pettersson，M.等，J Leukoc Biol.2000，67:423-431；Dannaeus，K.等，Mol Biol Rep.2005,32:149-157)。人源MYADM(hMYADM)選擇性表達在外周血來源的髓系細胞以及髓系白血病細胞，在PMA誘導髓系白血病細胞分化以及骨髓CD34^＋細胞向粒、單核細胞分化中，hMYADM的表達明顯上調(Wang，Q.等，Life Sci.2007,80:420-429.)。在全反式維甲酸誘導前髓系白血病Nb4細胞分化時表達顯著升高(Cui，W.等，MolBiol Rep.2001，28:123-138)。在人轉移性黑色素瘤臨床標本中也檢測到MYADM表達的改變(de Wit，NJ.等，Br J Cancer.2005，92:2249-2261)。這些結果較充分地揭示該分子是與髓系分化發育密切相關的細胞表面標志，有可能在白血病的發病機制以及誘導分化中起著重要作用。

MYADM分子可能有望獲得新的CD統一命名。CD(cluster of differentiation，白細胞分化抗原)是白細胞在正常或刺激后分化和成熟過程中的某個階段出現或消失的細胞表面標志，不同的細胞類群分化的特異性表達標志構成不同的生物學功能和臨床意義，許多CD分子都是有功能的分子，包括受體、酶、粘附分子、信號轉導分子、離子通道、調節分子等，在造血細胞的分化、發育、激活、免疫應答以及疾病的發生中發揮著極其重要的作用，CD分子還用于白血病的免疫學分型，而且可能作為新藥設計的靶點。如CD33已經成為診斷急性髓系白血病(AML)，尤其是未分化型AML的重要標志，同時可用于區分AML與淋巴系白血病。抗CD33單抗已應用于治療AML的臨床I期研究，可選擇性去除惡性造血，回復正常造血過程(Caligaris-Cappio，F.等，Lancet.2001,358:49-55)。每一個新CD抗體的出現，意味著新抗原相應編碼基因及功能的闡明。隨著對細胞分化抗原分子研究的不斷深入，可闡明一些造血細胞分化發育過程的理論問題，并將對疾病發病機理、診斷、預后及療效判定等方面的研究起到極大的推動作用。