[發明專利]一種用于檢測肺癌自身抗體的液相芯片試劑盒

有效

• 申請號: 201310289479.0
• 申請日: 2013-07-10
• 公開（公告）號: CN103383395A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發明（設計）人: 馬勝林;王孝舉;吳國君;夏冰;陳雪琴;王聞哲
• 申請（專利權）人: 杭州市第一人民醫院;浙江省醫學科學院;橫店集團家園化工有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及醫藥生物領域，尤其涉及一種用于檢測肺癌自身抗體的液相芯片試劑盒。

背景技術

近年來，我國癌癥的發生率呈明顯上升趨勢，占死亡原因的20%以上，居各類死因之首。世界衛生組織預測，到2020年，將有2000萬新發癌癥病例，其中死亡人數達1200萬，且絕大多數發生在發展中國家。如果不采取任何有效的預防與控制措施，預計到2020年，我國每年的新發生癌癥總數和癌癥死亡總數將達300萬左右，患病總數將達660萬。

肺癌目前是全球范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。近20年來，由于大力推行戒煙，歐洲和美國等西方國家男性肺癌的發病率已開始下降，但女性肺癌的發病率卻持續上升。我國是香煙生產和銷售大國，不論男性還是女性，肺癌的發病率均呈持續上升趨勢，尤以女性發病率上升更快。臨床研究表明，原位癌治愈率接近100%，Ⅰ期肺癌患者的5年生存率達60%～90%，而IIIb和Ⅳ期患者的5年生存率僅5%～20%，因此，早期診斷早期發現，早期治療是降低肺癌死亡率，延長生存期的關鍵。然而，由于缺乏理想的早期診斷方法，肺癌的早期診斷率僅14%左右。因此，如何提高肺癌早期診斷水平已成為肺癌防治工作者面臨的嚴肅而緊迫的任務。

血清中的腫瘤抗原等標志物能誘導機體產生自身抗體，在腫瘤發生還未能被臨床檢查手段檢測到的早期，機體免疫系統就可監測到低水平表達的腫瘤抗原的存在，并引發免疫反應，產生大量的抗體，起到有效的生物信號放大作用。

對比臨床常用的腫瘤標記物蛋白，自身抗體的檢測在腫瘤診斷中占極大的優勢。第一，可以對腫瘤進行早期診斷，便于早期治療，提高治愈率。多項研究表明在影像學檢查確診實體癌數月至數年前即可檢測到自身抗體的存在，甚至在腫瘤確診前2-10年就可檢測到血清中有針對腫瘤抗原的抗體。第二，自身抗體比相應腫瘤抗原滴度高，針對單一抗原的自身抗體通過免疫反應大量擴增，在血清中大量白蛋白存在干擾的情況下，較其它標志物更易檢測到。因此分析腫瘤患者免疫系統的改變，而不是腫瘤蛋白本身成為一個非常重要的研究途徑。第三，標本易獲得，檢測結果相對穩定。腫瘤抗原一旦被分泌入血，可能很快地被降解或清除，而自身抗體不像其它多肽一樣易受蛋白酶水解作用，可在相當長一段時間內在血清中穩定、持續存在，并且自身抗體的半衰期很長，大約是7天，每小時的波動很小，理化性質穩定，在-80C長期保存對其活性幾乎無影響。第四，其操作所用的試劑和技術簡便易行，重復性好，通過常規的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）或酶聯免疫分析（EIA）就可以檢測。

腫瘤發生是一個多基因、多步驟的癌變過程，盡管腫瘤自身抗體是腫瘤診斷的理想候選指標，僅靠一個指標進行診斷，常常會導致假陽性和假陰性，所以，單個腫瘤自身抗體檢測必然存在一些局限性，影響肺癌的臨床診斷。其一，在特定腫瘤中，單一的腫瘤自身抗體的陽性率通常只有10%，在最理想的腫瘤群體中也僅為20-30%；其二，腫瘤發病中的很多生物途徑為多種疾病（包括腫瘤以及其他自身免疫性疾病）所共有，一般情況下，同種腫瘤可異常地產生一種或多種腫瘤自身抗體，而不同腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型既可檢出共同的腫瘤抗體，也可檢出不同的腫瘤抗體。

近年來的研究傾向于針對聯合抗體譜進行癌癥檢測。Chapman等運用ELISA對肺癌（包括非小細胞肺癌和小細胞肺癌）患者與正常對照人群血清中針對7種腫瘤抗原（p53、c-myc、HER2、NY-ESO-1、CAGE、MUC1和GBU4-5）的血清抗體進行檢測，結果顯示單一抗體檢出陽性率在5%-36%之間，診斷的特異性達到96%-100%，而7種抗體聯合檢測的敏感性可達76%，特異性為92%。這充分說明腫瘤標志物的單項檢測，特異性較高，但敏感性和準確性較低；聯合檢測后，雖然特異性有所降低，但敏感性和準確性均有很大的提高。

因此聯合檢測多種腫瘤相關的自身抗體，形成腫瘤本身獨有的自身抗體“指紋圖譜”，將診斷及預后的特異性和敏感性提高到單一個體所無法達到的水平，由于這些自身抗體通常在臨床癥狀前出現，因而具有重要的診斷和預后判斷價值。

發明內容

本發明提供了一種用于檢測肺癌自身抗體的液相芯片試劑盒，實現了血清中多種抗體的聯合檢測，對肺癌的檢測準確性高。

一種用于檢測肺癌自身抗體的液相芯片試劑盒，包括偶聯抗原蛋白的微球、生物素標記的二抗、鏈霉親和素-藻紅蛋白、反應緩沖液和稀釋緩沖液，抗原蛋白為p62、NY-ESO-1、p53和CAGE，其中，偶聯不同抗原蛋白的微球具有不同的顏色編碼；二抗為生物素標記的抗人免疫球蛋白G。