[發明專利]缺血性心臟病檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201310286843.8
• 申請日: 2013-07-10
• 公開（公告）號: CN103344768A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 黃君富;羅陽;蔣天倫;府偉靈
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;G01N23/223
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體而言，涉及一種缺血性心臟病檢測試劑盒及其應用。

背景技術

缺血性心臟病(IHD)是由于脂質代謝不正常，在動脈內膜一些類似粥樣的脂類物質堆積而成白色斑塊，這些斑塊漸漸增多造成動脈腔狹窄，使血流受阻，導致心臟缺血，產生心絞痛，是臨床常見的心臟血管急癥，也是造成急性死亡的重要原因。目前缺血性心臟病(IHD)是導致世界范圍內死亡和傷殘的首要疾病。據統計1760萬的美國人受該病影響，并造成每年大約45萬的美國人因該病死亡。因此，臨床工作者一直致力于尋找一種敏感的心肌缺血標志物，能在IHD早期可逆階段檢出，這對于提高IHD早期診斷和減少死亡率具有重要的臨床意義。

傳統檢查方法都不能作為診斷心肌缺血的“金標準”，現目前IHD的診斷主要依靠于心電圖，影像和各種生化標志物的聯合診斷。生化標志物如：肌鈣蛋白，CK-MB以及肌紅蛋白被認為是早期診斷IHD最為重要的指標。其中，CK-MB與乳酸脫氫酶，天冬氨酸轉氨酶聯合檢測是一種常規診斷心肌損傷的方法。但其持續時間短，受損的骨骼肌肉同樣也能夠釋放上述酶進入血液里，大大降低了特異性，故此方法很大程度上限制了IHD的診斷。而肌鈣蛋白與CK-MB相比，雖提供了更高的特異性來診斷心肌損傷，但它總是在發病后12小時才達到峰值，不利于在IHD早期心肌損傷可逆階段做出診斷。

近年來，學者觀察到不穩定型心絞痛和心肌梗死發作早期患者的人血清白蛋白(HSA)轉化為缺血修飾白蛋白(IMA)，揭示IMA可用于心肌缺血的早期診斷。IMA與傳統的心肌壞死指標不同，在心肌缺血發作后5-10min血中濃度即可升高，能夠輔助臨床醫生早期明確缺血的診斷，早期干預治療，改善患者的預后和減少病死率，且具有更高的敏感、特異性。之前質譜法分析揭示了IMA與HSA之間的差異僅僅依賴于最后四個氨基N-末端的變化，且已定位在HSA氨基末端N-天門冬氨酸(Asp)-丙氨酸(Ala)-組氨酸(His)-賴氨酸(Lys)序列的變化上。并且由于IMA和HSA抗原之間無顯著差異，幾乎所有現有的常規免疫或生化檢測無法準確量化IMA的濃度。

直到現在，經FDA批準的IMA的檢測方法也只有一種：白蛋白鈷結合試驗(ACB)。該方法的原理是基于血清中正常白蛋白以活性形式存在，加入氯化鈷溶液后，Co²⁺可與白蛋白N-末端結合，溶液中的游離Co²⁺濃度較低，而心肌缺血患者血清中含有較多的修飾白蛋白，加入同樣濃度的氯化鈷溶液后，由于IMA喪失了與Co²⁺結合的能力，使溶液中存在較高濃度的游離鈷，加入二巰蘇糖醇(DTT)，溶液可與游離Co²⁺發生顏色反應，以分光光度法測定其吸光度，即可推測IMA含量。但ACB檢測結果易受多種因素干擾，從檢測原理上看ACB試驗檢測IMA是通過測量與未改變的HSA(iHSA)結合后游離的Co²⁺，從而間接反應溶液中IMA濃度。這種間接方式易受HSA總體水平過高或過低的影響。此外，它的潛在影響的因素也很多，例如螯合劑和溶血的存在，這就要求在分析前排除任何可能的干擾。因此，ACB方法并不能檢測真實的IMA濃度。

因此，需要采用更為先進的技術以消除內源性干擾。那么如何保證其檢測的特異性？在本文中，我們提出了一種新型無干擾檢測技術即量子點耦合x射線熒光光譜技術(Q-XRF)，用于IMA的準確檢測。通過計算總HSA水平和iHSA水平之間的差異，以確定真正的IMA值。

發明內容

本發明的目的是提供一種缺血性心臟病檢測試劑盒及其應用，為了實現本發明的目的，擬采用如下技術方案：

本發明一方面涉及一種缺血性心臟病檢測試劑盒，其特征在于所述的所述的試劑盒包括HSA一抗，QD偶聯的HSA二抗復合物，Co²⁺，PBS緩沖溶液。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的試劑盒包括基質材料，所述的基質材料選自玻片、纖維素膜和/或聚乙烯多孔板。

本發明另一方面還涉及上述試劑盒的一個應用，所述的應用為在制備檢測缺血性心臟病的試劑盒中的應用。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的試劑盒用于檢測血液中的IMA含量。

本發明另一方面涉及一種檢測離體樣本血液中IMA含量的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)總HSA測定：

采用物理吸附法將HSA一抗標記在基質上或者通過氨基和羧基間的脫羧反應將HSA一抗標記在基質上；