[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于檢測(cè)抗MDA5抗體的試劑盒及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310285762.6
• 申請(qǐng)日: 2013-07-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103336133A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭捷;曹華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/548
• 代理公司: 北京市盈科律師事務(wù)所 11344
• 代理人: 郭桂峰;姚海嵩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，涉及一種用于檢測(cè)抗MDA5抗體的試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

特發(fā)性炎性肌病(idiopathic?inflatnmatory?myopathy，IIM)是一種以侵害骨骼肌為主的全身性疾病，臨床特點(diǎn)為骨骼肌無(wú)力、皮膚病變、系統(tǒng)性器官損害以及有特異性抗體的產(chǎn)生。多發(fā)性肌炎和皮肌炎是最常見(jiàn)的2種類(lèi)型。間質(zhì)性肺疾病(ILD)是多發(fā)性肌炎/皮肌炎常見(jiàn)的一種并發(fā)癥，分為2個(gè)亞類(lèi)：急性/亞急性間質(zhì)性肺炎(acute/subacute?interstitialpneumonia，A/SIP)和慢性間質(zhì)性肺炎(CIP)。其中A/SIP病情進(jìn)展迅速，愈后差，有文獻(xiàn)報(bào)道6個(gè)月的生存率僅為40.8％～45％。因此早期診斷及積極治療A/SIP，對(duì)改善患者預(yù)后至關(guān)重要。

2005年，血清抗MDA5抗體由日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)報(bào)道它與臨床無(wú)肌病性皮肌炎(clinical?amyopathic?dermatomyositis，CADM)密切相關(guān)。隨后經(jīng)科研人員研究證實(shí)，該抗體所識(shí)別的自身抗原為黑素瘤分化相關(guān)基因5(melanoma?differentiation_associated?gene5，MDA5)。人MDA5蛋白，由1025個(gè)氨基酸殘基組成的IFIH1編碼。N端包括2個(gè)串聯(lián)重復(fù)的CARD（Caspase?activation?and?recruitment?domain）域，中間為DExD/H解旋酶區(qū)（DExD/H?helicases），C端為無(wú)活性的抑制域（repressor?domain,CTD）。MDA5蛋白的三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域在識(shí)別病毒的過(guò)程中各司其職，CARD結(jié)構(gòu)域與啟動(dòng)抗病毒信號(hào)級(jí)聯(lián)有密切聯(lián)系，DExD/H解旋酶結(jié)構(gòu)域有6個(gè)高度保守基序（Motif），Motif?III參與形成CARD、DExD/H解旋酶結(jié)構(gòu)域以及CTD之間的聯(lián)系。Motif?IV和V在與RNA的結(jié)合中發(fā)揮重要作用。Motif?V和VI與核苷酸的結(jié)合有關(guān)。C端存在CTD，具有結(jié)合RNA的重要功能，但其既不刺激也不阻礙IFN-β啟動(dòng)子的表達(dá)。

經(jīng)研究人員通過(guò)抗體與皮肌炎臨床相關(guān)性的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)表明，抗MDA5抗體更多見(jiàn)于皮肌炎合并A/SIP患者，在A/SIP診斷病例中檢測(cè)的敏感性及特異性可分別高達(dá)85%及92%。由此可見(jiàn)，研究抗原MDA5蛋白的抗原表位并對(duì)抗MDA5抗體進(jìn)行檢測(cè)，可以有效的幫助臨床預(yù)判A/SIP，具有重要意義。

目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上還未出現(xiàn)市場(chǎng)化的抗MDA5抗體檢測(cè)試劑盒，因此，鑒于檢測(cè)抗MDA5抗體的重要性，開(kāi)發(fā)一種可以廣泛應(yīng)用，高效靈敏的抗MDA5抗體檢測(cè)試劑盒以及相應(yīng)的檢測(cè)方法就顯得尤為緊要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)抗MDA5抗體的試劑盒及其相應(yīng)的檢測(cè)方法，可以高效靈敏且特異性檢測(cè)待測(cè)樣品中的抗MDA5抗體。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種用于檢測(cè)抗MDA5抗體的試劑盒，包含由抗MDA5抗體識(shí)別的SEQ?ID:1所示的MDA5蛋白或其片段。

進(jìn)一步的，所述抗MDA5抗體識(shí)別的MDA5蛋白片段包含SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4中的至少一種。

其中，所述試劑盒通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)抗MDA5抗體。

進(jìn)一步的，所述試劑盒包含：

（1）抗原，所述抗原包含MDA5蛋白或其片段；

（2）連接試劑，用于連接待測(cè)樣品與（1）所述抗原之間的反應(yīng)；

（3）顯示試劑，用于標(biāo)記（2）中待測(cè)樣品與抗原的反應(yīng)產(chǎn)物；

（4）對(duì)照樣品，不含抗MDA5抗體，用于進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)。

其中，所述對(duì)照樣品包含陽(yáng)性對(duì)照樣品或陰性對(duì)照樣品。

本發(fā)明還提供了利用上述試劑盒檢測(cè)抗MDA5抗體的檢測(cè)方法，使待測(cè)樣品與所述試劑盒中的MDA5蛋白或其片段進(jìn)行反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物。

其中，所述待測(cè)樣品為血液、血清或血漿中的任意一種。

進(jìn)一步的，所述待測(cè)樣品中的抗MDA5抗體通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)。

更進(jìn)一步的，所述檢測(cè)反應(yīng)包含以下步驟：

（1）電泳：利用MDA5蛋白或其片段進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，得到蛋白電泳膠；

（2）電轉(zhuǎn)移：將蛋白電泳膠通過(guò)電轉(zhuǎn)移裝置轉(zhuǎn)移至固相載體上，得到固定蛋白產(chǎn)物；