[發明專利]一種石斛蘭試管內雜交育種方法

有效

• 申請號: 201310285055.7
• 申請日: 2013-07-08
• 公開（公告）號: CN103314861A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 曾宋君;吳坤林;張建霞;鄭楓;段俊
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種石斛蘭試管內雜交育種方法，其特征在于，包括以下步驟：

材料：開花時選取生長健壯的不同品種的石斛蘭母株進行人工授粉，待果實基本成熟時，選擇果實中的種子用于無菌播種；

a、無菌播種：先將果實消毒后，用無菌水沖洗若干遍，再切開果實，用接種針將黃白色粉末狀胚接種到種子萌發培養基上培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，種子萌發，形成原球莖，直至形成2～3厘米高的完整的小植株；

b、試管開花誘導和試管內雜交育種：將2～3厘米高的完整的小植株轉到試管開花誘導培養基上，培養直至開花，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，選取試管內花色、花形正常的不同品種的石斛蘭花朵在無菌條件下進行相互間的人工授粉，授粉后將帶花植株轉移到生根壯苗培養基上培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，直至果實成熟，

c、雜交組合的無菌播種和試管開花誘導：采取b步驟的試管內的成熟果實，切開，將胚在種子萌發培養基上播種培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，種子萌發形成原球莖，直至形成完整的小植株，再將小植株轉移到試管開花誘導培養基上進行開花誘導培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，試管內開花后，觀察雜交組合的花形和花色；

d、新品種的組織培養：開花后選擇花形、花色優良的株系進行組織培養，操作時以優良株系的莖尖或莖節為外植體，在原球莖誘導和繼代增殖培養基上進行繼代增殖培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，形成類原球莖，將類原球莖轉移到生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，得到試管苗；

e、試管苗移栽：當試管苗能長至3～4厘米高時，轉移到自然光下進行煉苗，再移栽到基質中培養，得到石斛蘭雜交種苗；

所述的種子萌發培養基為每升含有：花寶1號2～3克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖15～30克、MS培養基的維生素（含肌醇）成分、活性炭0.5～1克，常量的瓊脂，余量為水，pH5.2～5.4；

所述的試管開花誘導培養基每升含有：花寶1號1～1.5克、花寶2號1～1.5克、水解酪蛋白0.1～0.3克、6-芐基嘌呤0.5～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.5毫克、多效唑0.1～0.5毫克、蔗糖30～40克、MS培養基的維生素（含肌醇）成分，常量的瓊脂，余量為水，pH5.2～5.4；

所述的生根壯苗培養基每升含有：花寶1號1～2克、花寶2號1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、蔗糖15～30克、MS培養基的維生素（含肌醇）成分、萘乙酸0.1～0.5毫克、香蕉汁50～100克、活性炭0.5～1克、常量的瓊脂，余量為水，pH5.2～5.4；

所述的原球莖誘導和繼代增殖培養基每升含有：花寶1號1～2克，花寶2號1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖20～30克、MS培養基的維生素（含肌醇）成分、6-芐基嘌呤0.5～2.0毫克、常量的瓊脂，余量為水，pH5.2～5.4。

2.根據權利要求1所述的石斛蘭試管內雜交育種方法，其特征在于，所述的步驟a無菌播種：先將果實消毒后，用無菌水沖洗若干遍，其為先將果實用體積分數75%的酒精浸泡30秒后置于質量分數0.1%的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水漂洗4～5次。

3.根據權利要求1所述的石斛蘭試管內雜交育種方法，其特征在于，所述的步驟d的類原球莖能再轉接到新的原球莖誘導和繼代增殖培養基上進行繼代增殖培養，培養條件為：培養溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，形成的類原球莖，類原球莖再轉移到生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養。

4.根據權利要求1所述的石斛蘭試管內雜交育種方法，其特征在于，所述的試管苗移栽是當試管苗能長至3～4厘米高時，每叢有2～3個芽時，轉移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，用泥炭和蘭石按體積比1：1比例混合的混合基質中栽培，常規條件下培養，得到石斛蘭雜交種苗。