[發(fā)明專利]人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子融合蛋白及其編碼基因和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310282455.2
• 申請(qǐng)日: 2013-07-05
• 公開（公告）號(hào): CN103333256A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉德虎;譚亞清;李剛強(qiáng);王楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/82;A61K38/19;A61P17/02
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.一種融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括基因沉默抑制子、2A多肽和人酸性成纖維細(xì)胞因子蛋白，所述人酸性成纖維細(xì)胞因子蛋白為全部或部分天然的人酸性成纖維細(xì)胞因子蛋白；

或者，所述人酸性成纖維細(xì)胞因子蛋白為天然的人酸性成纖維細(xì)胞因子蛋白與另外一個(gè)成纖維細(xì)胞因子蛋白、或另外一個(gè)具有不同生物學(xué)功能的蛋白共表達(dá)或拼接在一起形成融合蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白為P19-2A-haFGF，其中，P19為番茄叢矮病毒P19蛋白；2A為口蹄疫病毒2A多肽；haFGF為人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白P19-2A-haFGF為：

（1）SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

（2）SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸且具有同等功能的由（1）衍生的蛋白質(zhì)。

4.編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述融合蛋白的基因；優(yōu)選地，所述基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

5.含有權(quán)利要求4所述基因的重組表達(dá)載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體為pBI-P19-2A-haFGF，其構(gòu)建方法包括如下步驟：

（1）人工合成核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的P19蛋白-2A多肽-人酸性成纖維細(xì)胞因子融合蛋白編碼基因；

（2）將步驟（1）得到的基因克隆至pEASY-T1載體，獲得載體pT-P19-2A-haFGF；

（3）用限制性內(nèi)切酶XbaI和SacI分別對(duì)載體pT-P19-2A-haFGF和pBI121進(jìn)行雙酶切，回收P19蛋白-2A多肽-人酸性成纖維細(xì)胞因子融合蛋白編碼基因片段和pBI121載體片段，連接，獲得重組表達(dá)載體pBI-P19-2A-haFGF。

7.含有權(quán)利要求4所述基因或含有權(quán)利要求5或6所述重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。

8.一種制備轉(zhuǎn)基因丹參的方法，其特征在于，所述方法為將權(quán)利要求4所述基因或權(quán)利要求5或6所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化丹參細(xì)胞，從轉(zhuǎn)基因丹參細(xì)胞中再生出完整的轉(zhuǎn)基因丹參。

9.一種含人酸性成纖維細(xì)胞因子重組蛋白的制劑；優(yōu)選地，所述制劑為粉劑、膏劑、噴霧劑或其它制劑。

10.權(quán)利要求9所述制劑的制備方法，其特征在于，所述方法為從權(quán)利要求8所述方法制備的轉(zhuǎn)基因丹參中提取人酸性成纖維細(xì)胞因子重組蛋白，或者直接使用所述轉(zhuǎn)基因丹參的器官、組織或粗提取物，將其加工成所述制劑。