[發明專利]EGF-Fc融合蛋白及其哺乳動物表達體系高表達生產方法

有效

• 申請號: 201310282127.2
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN103343134A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 江永海;朱月珍;陸雅臣
• 申請（專利權）人: 江蘇普羅賽生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N15/79;C12N5/071;A61K38/18;A61K8/64;A61P17/02;A61Q1/00
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1.一種用于哺乳動物表達體系高表達EGF-Fc融合蛋白的核酸序列，其特征在于包含：Kozak序列、IL-2信號肽編碼序列、人工內含子序列、EGF成熟肽編碼序列和Fc片段的編碼序列，如SEQ?ID?NO:4所示。

2.一種EGF-Fc融合蛋白，EGF是指人的EGF(Asn971-Arg1023)，Fc片段來自人的IgG1，其特征在于：所述Fc序列位于EGF序列的羧基端，所述EGF-Fc氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

3.根據權利要求2所述的EGF-Fc融合蛋白，其特征在于：所述EGF與Fc序列之間為直接融合或通過連接序列融合。

4.根據權利要求2所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于包括以下步驟：

1）人工合成編碼EGF-Fc融合蛋白的DNA序列；

2）EGF-Fc融合蛋白表達盒的構建；

3）表達載體的構建；

4）EGF-Fc融合蛋白的表達與純化；

5）EGF-Fc融合蛋白的鑒定與生物活性的測試。

5.根據權利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于：所述EGF-Fc融合蛋白表達盒依次包括Kozak序列、IL-2信號肽編碼序列、人工內含子序列、EGF成熟肽編碼序列和Fc片段的編碼序列。

6.根據權利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于：所述表達載體的構建是通過基因工程手段將EGF-Fc融合蛋白編碼序列亞克隆到具有真核表達元件的載體上。

7.根據權利要求4所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于：所述載體為真核載體。

8.根據權利要求7所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于：所述真核載體為哺乳動物細胞表達載體。

9.根據權利要求7所述的EGF-Fc融合蛋白哺乳動物表達體系高表達生產方法，其特征在于：所述真核載體能被宿主細胞高效表達。

10.根據權利要求3所述的EGF-Fc融合蛋白的用途，其特征在于：所述EGF-Fc融合蛋白可用于哺乳動物無血清培養基添加劑、治療燒傷和燙傷的藥物開發、化妝品活性添加劑以及作為生物制劑用于科學研究。