[發(fā)明專利]用于鑒定人類腺病毒55型的引物組合物以及它們的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310280808.5
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN104278024A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦成峰;姜濤;劉娟;鄧永強;朱舜亞;秦鄂德
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于鑒定人類腺病毒55型的引物組合物以及它們的應(yīng)用。

背景技術(shù)

人腺病毒（Human?Adenovirus，HAdV）是一群無包膜的雙鏈DNA病毒，分為1～55個血清型，分別劃入A～F共6個血清學(xué)分組。人腺病毒經(jīng)呼吸道和消化道傳播，引起多種感染，對小兒和免疫缺陷者危害嚴(yán)重。腺病毒感染人體可能引發(fā)的疾病包括：急性腺病毒肺炎、急性胃腸炎、眼角膜炎、乳糜瀉和急性間質(zhì)性腎炎等。在兒童急性下呼吸道感染患者中腺病毒感染陽性率可高達4.1%。在最近幾十年的北美、歐洲及亞洲均認(rèn)為人類腺病毒B組感染是導(dǎo)致急性呼吸系統(tǒng)感染（ARD）的重要因素。

HAdV11、HAdV14型屬于腺病毒B組，傳統(tǒng)的HAdV11型主要導(dǎo)致腎及泌尿系統(tǒng)的感染，HAdV14則引起人呼吸系統(tǒng)感染。新發(fā)現(xiàn)的人類腺病毒55型（HAdV55），在其現(xiàn)之初命名為HAdV11a，對人有較強的致病性，易在軍隊、學(xué)校等密集人群發(fā)生呼吸道傳染病流行，在免疫低下的人群中甚至出現(xiàn)了死亡病例。基因分析表明HAdV55是HAdV14與HAdV11的Hexon區(qū)域重組并發(fā)生若干核苷酸突變得到的毒株。

腺病毒的現(xiàn)有檢測方法主要為普通PCR和實時熒光定量PCR等。普通RT-PCR和實時熒光定量RT-PCR等常需要花費較長時間或者需要特定的儀器，難以滿足暴發(fā)疫情快速診斷的需要。

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法（loop-mediated?isothermal?amplification,LAMP）法具有在等溫條件下即可高速、高特異、高靈敏的擴增靶序列的特點。該方法利用4條特異引物（F3、FIP、B3和BIP）在高活性鏈置換DNA聚合酶作用下，不斷復(fù)制擴增核酸。在反應(yīng)體系中可添加2條環(huán)狀引物L(fēng)F和LB，它們也分別與莖環(huán)結(jié)構(gòu)結(jié)合啟動鏈置換合成，周而復(fù)始。擴增的最后產(chǎn)物是具有不同個數(shù)莖環(huán)結(jié)構(gòu)、不同長度DNA的混合物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒定人類腺病毒55型的引物組合物以及它們的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的第一組引物組合物（引物組合物甲），包括DNA片段-Ⅰ、DNA片段-Ⅱ、DNA片段-Ⅲ和DNA片段-Ⅳ；所述DNA片段-Ⅰ、所述DNA片段-Ⅱ、所述DNA片段-Ⅲ和所述DNA片段-Ⅳ均為單鏈DNA片段；所述DNA片段-Ⅰ如序列表的序列1所示，所述DNA片段-Ⅱ如序列表的序列2所示，所述DNA片段-Ⅲ如序列表的序列3所示，所述DNA片段-Ⅳ如序列表的序列4所示。所述引物組合物甲具體可由所述DNA片段-Ⅰ、所述DNA片段-Ⅱ、所述DNA片段-Ⅲ和所述DNA片段-Ⅳ組成。所述引物組合物甲還可包括DNA片段-Ⅴ和/或DNA片段-Ⅵ；所述DNA片段-Ⅴ和所述DNA片段-Ⅵ均為單鏈DNA片段；所述DNA片段-Ⅴ如序列表的序列5所示，所述DNA片段-Ⅵ如序列表的序列6所示。所述引物組合物甲具體可由所述DNA片段-Ⅰ、所述DNA片段-Ⅱ、所述DNA片段-Ⅲ、所述DNA片段-Ⅳ、DNA片段-Ⅴ和DNA片段-Ⅵ組成。

本發(fā)明提供的第二種引物組合物（引物組合物乙），包括DNA片段-Ⅶ、DNA片段-Ⅷ、DNA片段-Ⅸ和DNA片段-Ⅹ；所述DNA片段-Ⅶ、所述DNA片段-Ⅷ、所述DNA片段-Ⅸ和所述DNA片段-Ⅹ均為單鏈DNA片段；所述DNA片段-Ⅶ如序列表的序列1的反向互補序列所示，所述DNA片段-Ⅷ如序列表的序列2的反向互補序列所示，所述DNA片段-Ⅸ如序列表的序列3的反向互補序列所示，所述DNA片段-Ⅹ如序列表的序列4的反向互補序列所示。所述引物組合物乙具體可由所述DNA片段-Ⅶ、所述DNA片段-Ⅷ、所述DNA片段-Ⅸ和所述DNA片段-Ⅹ組成。所述引物組合物乙還可包括DNA片段-Ⅺ和/或DNA片段-Ⅻ；所述DNA片段-Ⅺ和所述DNA片段-Ⅻ均為單鏈DNA片段；所述DNA片段-Ⅺ如序列表的序列5的反向互補序列所示，所述DNA片段-Ⅻ如序列表的序列6的反向互補序列所示。所述引物組合物乙具體可由所述DNA片段-Ⅶ、所述DNA片段-Ⅷ、所述DNA片段-Ⅸ、所述DNA片段-Ⅹ、所述DNA片段-Ⅺ和所述DNA片段-Ⅻ組成。

本發(fā)明還保護以上任一所述的引物組合物在輔助鑒定人類腺病毒55型中的應(yīng)用。所述應(yīng)用為非疾病診斷方法。

本發(fā)明還保護一種輔助鑒定人類腺病毒55型的方法，依次包括如下步驟：

（1）以待測病毒的基因組DNA為模板，用以上任一所述的引物組合物進行環(huán)介導(dǎo)等溫擴增；

（2）通過檢測步驟（1）的擴增產(chǎn)物輔助鑒定待測病毒是否為人類腺病毒55型。