[發明專利]一種酶聯免疫檢測及制備方法

有效

• 申請號: 201310280425.8
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN103472234A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 趙以睿;王慕元;張鵬;連繪
• 申請（專利權）人: 武漢三鷹生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.人FN1的單抗包被酶標板的制法，通過下列步驟制備而成：

以BC005858?DNA為模板，擴增FN1基因片段，與載體PET28a連接，轉化BL21，表達大量30KD?FN1蛋白片段；

將30KD?FN1蛋白免疫小白鼠，取其脾細胞與鼠骨髓瘤細胞融合，選擇陽性雜交瘤細胞于鼠腹水中培養，純化蛋白得到抗FN1的單抗；

將所得單抗用pH9.6的碳酸鹽緩沖溶液稀釋后包被96孔板，100μl/孔，4℃?16-24小時，PBST洗滌3次，每次30秒，然后除盡孔內液體；

用含8%小牛血清的pH7.4的PBS封閉，每孔200μl，37℃，2小時，PBST洗滌3次，干燥后密封；該板即為抗FN1的單抗包被的酶標板，可用于FN1的特異性檢測。

2.應用權利要求1所述的人FN1的單抗包被酶標板的ELISA檢測試劑盒，其特征為：由權利要求1所述的抗FN1的單抗包被的酶標板、FN1標準品、FN1的陽性對照樣品、抗FN1的多抗、樣品稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液構成，具體組分為：（1）酶標板：由FN1的單抗包被；（2）樣品稀釋液：含8%?小牛血清和1%?抗人IgG的pH7.4的0.01mol/l?PBS；（3）洗滌液：pH7.4?PBST；（4）酶標二抗：購自美國R＆D?systems的辣根過氧化物酶（horseradish?peroxidase，HRP）標記的羊抗兔IgG；（5）FN1標準品：FN1的PBS溶液，FN1終濃度為1?mg/ml；（6）FN1陽性對照樣品：FN1的PBS溶液，FN1終濃度為1?mg/ml；（7）抗FN1的多抗：多抗的PBS溶液，多抗的終濃度為1mg/ml；（8）顯色液：TMB-H₂O₂系統；（9）終止液：2mol/l?H₂SO₄溶液。